NaOH滴定到pH8. 0。
[0052] 原始電位滴定數(shù)據(jù)傳遞到電腦后換算為pH-表面電荷曲線。
[0053] pH-表面電荷曲線作為新層面測(cè)試平臺(tái)可以很清楚地揭示許多市場(chǎng)上的反相色譜 廣品的表面電荷。
[0054] B型球形硅膠本身有8 ymol/m2的硅醇基，其中只有不到一半硅醇基是活性能夠解 離的。在酸性pH值條件下，僅僅少量非?；钴S的硅醇基能夠解離。pH值增加，越來越多的 硅醇基解離。在pH-表面電荷密度曲線上，硅膠表面總是攜帶負(fù)電荷。pH值增加，硅膠表面 負(fù)電荷密度越大。在理論上，完全的反相鍵合和封端將導(dǎo)致PH3~8硅膠表面負(fù)電荷密度 成為零。從實(shí)際應(yīng)用角度出發(fā)，非?；钴S的在酸性pH值條件下能夠解離的硅醇基被完全鍵 合或封閉就好了。
[0055] 本實(shí)施例對(duì)實(shí)施例1超臨界流體封端方法制備的C18鍵合相、Supelco公司 Discovery HS C18和Supelco公司SupelcoilABZ Plus三種反相鍵合相的pH-表面電荷曲 線進(jìn)行了比較，結(jié)果見圖2。
[0056] 圖中Novel C18即實(shí)施例1中超臨界流體封端C18鍵合相，表面電荷密度為零，證 明能夠解離的硅醇基被完全鍵合或封閉。相應(yīng)的固-液回流封端方法制備的C18鍵合相等 同于美國(guó)Supelco公司Discovery HS C18〇
[0057] 美國(guó)Supelco公司Discovery HS C18仍然有比較多的活躍的娃醇基，色譜中體現(xiàn) 為許多堿性化合物拖尾嚴(yán)重。
[0058] 美國(guó)Supelco公司Supelcoil ABZ Plus用氨基丙基鍵合相合成，NH2功能團(tuán)不可 能完全反應(yīng)，因而在酸性pH值條件下硅膠表面電荷為正。pH值增加，等解離的硅醇基攜帶 的負(fù)電荷超過順 2功能團(tuán)攜帶的正電荷時(shí)，鍵合相表面電荷密度變?yōu)樨?fù)。因此Supelco ABZ Plus和其他一些使用類似的原理生產(chǎn)的鍵合相是兩性鍵合相，不是經(jīng)典的反相。色譜中體 現(xiàn)為許多堿性化合物由于正電荷-正電荷相互排斥作用峰形改善，酸性化合物在酸性pH值 條件下峰形拖尾，在中性pH值條件下由于解離沒有足夠的保留。
[0059] 實(shí)施例3 :Zeta電勢(shì)
[0060] pH-表面電荷密度曲線本身難以確定鍵合相的等電點(diǎn)（i.e.p)。伴隨的是Zeta電 勢(shì)測(cè)定。Supelco HS C18和Supelco ABZ Plus的Zeta電勢(shì)如圖3所不。
[0061] Supelco HS C18的等電點(diǎn)在pH2. 7,和硅膠本身的等電點(diǎn)差不多。Supelco ABZ Plus由于有殘留的NH2功能團(tuán)，等電點(diǎn)移向pH4. 4。
[0062] 由于超臨界流體封端最大程度封閉了活性硅醇基，Novel C18表面電荷密度幾乎 是零，Zeta電勢(shì)測(cè)定也無法觀察到表面電荷。
[0063] 實(shí)施例4:色譜測(cè)試
[0064] 超臨界流體封端最大程度封閉了活性硅醇基，導(dǎo)致高效液相色譜柱產(chǎn)品質(zhì)量有本 質(zhì)的增強(qiáng)。用本發(fā)明超臨界流體封端生產(chǎn)的100A C18、C8和市場(chǎng)上類似孔徑產(chǎn)品（知名 品牌高效液相色譜柱）進(jìn)行比較。
[0065] 測(cè)試化合物是三環(huán)抗抑郁藥丙咪嗪、阿米替林。
[0066] 流動(dòng)相為pH7磷酸緩沖液70 % +甲醇30 % (體積）。
[0067] 需要說明的是，實(shí)施例1中使用傳統(tǒng)固-液回流封端方法制備的5ym C1825cmX4. 6mm HPLC高效液相色譜柱，丙咪嗪、阿米替林拖尾因子分別為2. 0和2. 3(結(jié) 果見圖4A)。使用超臨界流體封端液回流封端方法制備的5ym C1825cmX4.6mm HPLC 高效液相色譜柱，丙咪嗪、阿米替林拖尾因子分別為1.08和1.09(結(jié)果見圖4B)。 Supelco Ascentis'?: C18 和 Discovery1-' C18, Waters 公司 Sunfire* C18 比較結(jié)果見圖 4C、 4D 和 4E。
[0068] 實(shí)施例5:堿性化合物色譜測(cè)試結(jié)果數(shù)據(jù)的比較
[0069] 用超臨界流體封端生產(chǎn)的l()〇AC18和知名品牌產(chǎn)品的堿性化合物色譜測(cè)試測(cè)試 數(shù)據(jù)的比較結(jié)果見表1:
[0070]表1
[0071]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法，其特征在于，使用二氧 化碳超臨界流體和/或二氧化碳亞臨界流體作為載體將封端試劑和催化劑帶到裝有硅膠 反相鍵合相的超/亞臨界流體反應(yīng)器中，封閉條件下進(jìn)行封端反應(yīng)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法，其特 征在于，所述封端反應(yīng)時(shí)間為3~24小時(shí)；所述封端反應(yīng)的壓力條件為50~600bar;所述 封端反應(yīng)的溫度為31. 2~200 °C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法，其特 征在于，還包括封端反應(yīng)結(jié)束后冷卻的步驟，以及冷卻后釋放封端試劑和催化劑的步驟。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法，其特 征在于，釋放封端試劑和催化劑后，還包括清洗封端反應(yīng)產(chǎn)物的步驟，以及干燥封端反應(yīng)產(chǎn) 物的步驟。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法，其特 征在于，所述的清洗是將封端反應(yīng)產(chǎn)物用乙腈，按1:1的體積比組成的甲醇和水混合液，丙 酮依次進(jìn)行清洗。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法，其特 征在于，所述的干燥條件為80°C氮?dú)獗Ｗo(hù)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1~6任一所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端 方法，其特征在于，所述的高效液相色譜反相鍵合相為C18、C8、phenyl、hexyl-phenyl、C5、 〇4、(：1沖??？、酰胺、酰酯或030鍵合相。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1~6任一所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端 方法，其特征在于，所述封端試劑包括1，1，3, 3, 5, 5-六甲基環(huán)三硅氮烷、八甲基環(huán)四硅氮 烷、1，1，3, 3, 5, 5, 7, 7, 9, 9-環(huán)五聚二甲基硅氧烷、1，1，3, 3, 5, 5, 7, 7, 9, 9, 11，11-十二甲 基環(huán)己硅氧烷、1，1，3, 3, 5, 5-六苯基環(huán)三硅氮烷、1，1，3, 3, 5, 5, 7, 7-八乙基環(huán)丁硅氨烷、 1，1，3, 3, 5, 5, 7, 7, 9, 9-十二乙基環(huán)戊硅氧烷、1，1，3, 3, 5, 5, 7, 7, 9, 9, 11，11-十二乙基環(huán) 己硅氧烷、二甲基二氯硅烷、二甲基二甲氧基硅烷、三甲基氯硅烷、甲氧基三甲基硅烷、二甲 基叔丁基氯硅烷、正丁基二甲基甲氧基硅烷、N-丁基甲基二氯化硅、正丁基甲基二甲氧基硅 烷、丁基三甲氧基硅烷、叔丁基三氯硅烷、甲基三氯硅烷和甲基三甲氧基硅烷中的一種或幾 種；所述催化劑包括N，0-雙三甲基硅基乙酰胺、氨、三乙胺、1，1，1，3, 3, 3-六甲基二硅亞胺 和N，N-二甲基三甲基硅胺中的一種或幾種。
9. 權(quán)利要求1~8任一所述的高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法在 分析和/或制備反相HPLC、UHPLC或UPLC產(chǎn)品中的應(yīng)用。
10. -種高效液相色譜柱，其特征在于，該色譜柱的反相鍵合相采用權(quán)利要求1~8任 一所述的方法進(jìn)行封端。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效液相色譜反相鍵合相的超/亞臨界流體封端方法，通過使用二氧化碳超臨界流體和/或二氧化碳亞臨界流體作為載體,將封端試劑和催化劑帶到裝有硅膠反相鍵合相的超/亞臨界流體反應(yīng)器中，封閉條件下進(jìn)行封端反應(yīng)。該方法能徹底封閉殘留的活躍硅烷醇基團(tuán)，生產(chǎn)完全電荷中性的疏水反相鍵合相，沒有殘留的活躍硅烷醇基團(tuán)和堿性化合物陽離子交換副作用，因此堿性化合物有非常對(duì)稱的峰形，保留時(shí)間和機(jī)理完全遵循化合物疏水性從低到高的順序。該方法反應(yīng)條件溫和，反相鍵合相無損傷，色譜柱壽命長(zhǎng)，生產(chǎn)批次重復(fù)性很好，最大限度地減少有毒的有機(jī)溶劑如甲苯的使用，最大限度地減少對(duì)環(huán)境的污染，并可實(shí)現(xiàn)工藝連續(xù)化和半自動(dòng)化。
【IPC分類】B01J20-30, B01J20-286
【公開號(hào)】CN104841405
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510232141
【發(fā)明人】楊育暉
【申請(qǐng)人】武漢科奧美萃生物科技有限公司
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年5月8日