1.一種數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)以ITO玻片作為基底,以設計有n個微電極條帶的菲林膠片作為掩膜,進行軟光刻,洗去曝光區(qū)的光刻膠后,用濃鹽酸浸泡后洗去光刻膠以外的ITO膜;然后洗去光刻膠,再用piranha溶液浸泡,最后將ITO玻片置于氯金酸溶液中,利用電沉積法在ITO玻片上修飾納米金顆粒,得到含n個納米金條帶的ITO玻片;其中,n≥10;
(2)在PDMS上打n×m個通孔,將通孔行列與納米金條帶對齊,利用等離子體鍵合法將PDMS鍵合到含n個納米金條帶的ITO玻片表面,得到納米金微電極陣列;其中,m≥10;
(3)用pH=9.8的二乙醇胺溶液將堿性磷酸酶溶液稀釋,然后加入含對氨基磷酸酚和AgNO3的溶液,混合均勻,得到預混反應液;
(4)向納米金微電極陣列的每個小孔中滴加等體積的預混反應液,37 ℃下反應30 min后,用超純水洗去小孔中多余的銀離子及對氨基磷酸酚,然后向每個小孔中加入KCl溶液,以Ag/AgCl絲作為對電極和參比電極,進行線性伏安掃描,記錄銀的溶出伏安信號;當小孔中不含堿性磷酸酶時,電信號讀出為0;當小孔中至少含一個堿性磷酸酶分子時,電信號讀出為1;
(5)將電信號通過MATLAB程序轉換成多色球,通過統(tǒng)計暗球和亮球的個數(shù)計算0或1的概率,然后通過泊松分布公式計算預混反應液中堿性磷酸酶的濃度。
2.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:軟光刻所使用的光刻膠為AZ4620光刻膠。
3.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:所述的piranha溶液為體積比7:3的濃硫酸/雙氧水混合液。
4.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:步驟(1)利用電沉積法在ITO玻片上修飾納米金顆粒的方式為:將ITO玻片置于氯金酸溶液中,以Ag/AgCl為電極,在恒電位-0.1 V下靜置20秒。
5.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:n=10, m=50。
6.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:二乙醇胺溶液的濃度為0.5 M;預混反應液中堿性磷酸酶的濃度為1-50 aM。
7.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:步驟(5)線性伏安掃描的條件為:電勢掃描范圍為-0.1 V~0.2 V,掃描速率為100 mV/s。
8.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:納米金微電極陣列中每個納米金條帶的寬度為100 μm,相鄰兩個納米金條帶間距為3 mm。
9.根據(jù)權利要求1所述的數(shù)字化單分子電化學檢測堿性磷酸酶的方法,其特征在于:PDMS上通孔的直徑為1 mm。