，通過換算最終得到待測(cè)地表水體樣品中雌酮（El)、17p-雌二醇（E2)、雌三醇 (E3)、17a- 乙炔基雌二醇（EE2)，BPA、BPS、BPAF的含量；
[0086] 量取地表水體原水水樣500mL，按10ng/L、20ng/L的添加量加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行步 驟一到步驟五預(yù)處理并測(cè)定7種雌激素結(jié)合體含量，按照下式進(jìn)行回收率計(jì)算：
[0087]
[0088] 式中，R為回收率，％ ;C為添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的水體樣品的雌激素結(jié)合體含量，ng/L; C。為未添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的水體樣品的雌激素結(jié)合體含量，ng/L。
[0089] 其它步驟及參數(shù)與【具體實(shí)施方式】一至九之一相同。
[0090] 采用以下實(shí)施例驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果：
[0091] 實(shí)施例一：
[0092] 本實(shí)施例中一種地表水體中環(huán)境雌激素的共檢測(cè)方法，具體是按照以下步驟制備 的：
[0093] 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
[0094] 主要儀器
[0095] 在線固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（onlineSPE-UPLC-MS/MS)帶有 2777自動(dòng)進(jìn)樣器。儀器型號(hào)為2777C-ACQUITYUPLC-Xevo?TQMS，購自美國Waters公司。 超聲波清洗器型號(hào)為KQ-500E購自江蘇昆山超聲儀器有限公司。
[0096] 分析天平型號(hào)ML204梅特勒購自托利多儀器有限公司。
[0097] 實(shí)驗(yàn)材料
[0098] 實(shí)驗(yàn)中所用的有機(jī)溶劑甲醇、乙腈等均為分析純，購自SIGMA公司。
[0099] 實(shí)驗(yàn)所用藥品均購自日本TCI，純度彡97%
[0100] 實(shí)驗(yàn)所用的空白樣品及實(shí)際檢測(cè)樣品從松花江現(xiàn)場采集的，處理后，儲(chǔ)存在4°C的 冰箱中備用。
[0101] 分析檢測(cè)
[0102] (1)樣品采集：量取原水水樣500mL，并用5mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH= 4,加入20μg內(nèi) 標(biāo)物質(zhì)BPA-d16，密封保存于低溫環(huán)境，并盡快檢測(cè)。
[0103] (2)預(yù)處理：將水樣通過0. 22μm通過玻璃纖維濾膜（美國PALL)的濾膜，由2777C 自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，通過在線固相萃取裝置OasisHLBDirectConnectHP柱進(jìn)行富集純化， 在線固相萃取條件見表三，以乙腈/水（1 :9，v:v)為淋洗液，用乙腈和超純水進(jìn)行洗脫。進(jìn) 入超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀ACQUITYUPLC-Xevo?TQMS中進(jìn)行分析。
[0104] 表二在線固相萃取條件
[0105]
[0106] (3)檢測(cè)分析：采用UPLC液相色譜一XEVOTQ串聯(lián)二級(jí)質(zhì)譜法對(duì)9種環(huán)境雌激素 進(jìn)行測(cè)定
[0107]色譜柱WatersACQUITYUPLCBEHCls(100mmX2.1mm，1.7μm);流動(dòng)相為乙腈 / 超純水。梯度洗脫條件詳見表四；
[0108] 表四液相色譜條件
[0109]
[0110] 離子源：電噴霧離子化源（ESI)，負(fù)離子方式檢測(cè)；掃描模式為多重反應(yīng)檢測(cè) (MRM)模式。毛細(xì)管電壓為3. 5kV，錐孔電壓為60V;脫溶劑氣溫度為400°C，流量為900L/ H，錐孔反吹氣流量為50L/h。其他質(zhì)譜參數(shù)見表五
[0111] 表五MRM監(jiān)測(cè)模式參數(shù)
[0112]
[0113] 每種環(huán)境雌激素選擇兩對(duì)離子對(duì)，其中一對(duì)為定量離子，另一對(duì)為定性離子。根 據(jù)定量離子峰面積對(duì)水中雌激素進(jìn)行定量分析，此外，還根據(jù)各物質(zhì)的出峰時(shí)間以及定量 離子峰和定性離子峰的面積之比對(duì)雌激素和孕激素進(jìn)行定性，以排除復(fù)雜基質(zhì)中其它化合 物的干擾。利用Masslynx4. 1工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，MasslynxTargetlynx進(jìn)行定量分析 (美國Waters公司）；各物質(zhì)定量色譜峰見圖9、圖10、圖11、圖12、圖13、圖14和圖15 ;
[0114] 利用選擇全掃描檢測(cè)模式（MRM)來進(jìn)行定性定量檢測(cè)，每種物質(zhì)都對(duì)其特定的一 對(duì)或者幾對(duì)母離子和子離子進(jìn)行檢測(cè)，可以有效地排除干擾物質(zhì)的干擾，因此提高了檢測(cè) 的靈敏度和定性定量的準(zhǔn)確度。如表一：
[0115] 本課題利用在線固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)所選環(huán)境雌激素進(jìn) 行定性和定量分析，建立了靈敏、高效的分析方法。而在線固相萃取可同時(shí)執(zhí)行洗脫和調(diào)節(jié) 任務(wù)，耗樣量少，自動(dòng)化程度高，可以減少總循環(huán)時(shí)間并且可以保證高回收率。如表二：
[0116] (4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，以內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量測(cè)定，內(nèi)標(biāo)物為BPA_d16
[0117] 所述的內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：利用分析天平準(zhǔn)確稱量7種環(huán)境雌激素，溶于色 譜純甲醇內(nèi)，配制成5. 0、10、25、50、100、200 μ g/L系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用液相色譜一 串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行分析，分別以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲 線，用于測(cè)定樣品中分析物的含量。
[0118] (5)樣品含量及回收率的測(cè)定
[0119] 采集自然水體樣品，按步驟（1)對(duì)水樣進(jìn)行預(yù)處理，再按步驟（2)進(jìn)行過濾，然 后用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)，并與步驟（4)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，通過換算最終得 到待測(cè)地表水體樣品中雌酮（El)、17p-雌二醇（E2)、雌三醇（E3)、17a-乙炔基雌二醇 (EE2)，BPA、BPS、BPAF的含量。
[0120] 采用同樣的水體樣品，按10ng/L、20ng/L的添加量加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行上述預(yù)處 理并測(cè)定7種環(huán)境雌激素結(jié)合體含量，重復(fù)試驗(yàn)7次，得到各環(huán)境雌激素加標(biāo)回收率表六；
[0121] 表六各物質(zhì)加標(biāo)回收率（η= 7)
[0122]
[0123] 根據(jù)上述方法計(jì)算出方法的檢測(cè)限為0.1~1.Ong/L。其中El為0.2ng/L，E2為 0· 5ng/L，E3 為 0· 8ng/L，EE2 為 1.Ong/L，BPA為 0· 3ng/L，BPS為 0·lng/L，BPAF為 0· 6ng/ L?？梢姳痉椒M足痕量分析的要求。
[0124] 實(shí)施例2
[0125] 采集某河流水體樣品，迅速裝入洗凈的4L棕色采樣瓶中并放入帶有冰塊的保溫 箱內(nèi)（<4°C)，帶回實(shí)驗(yàn)室，按步驟1對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，再按步驟2進(jìn)行過濾，最后按步驟 3用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，通過換算最終得到待測(cè)樣品中幾種 環(huán)境雌激素的含量。其中雌激素E1、E2、E3和EE2的濃度范圍分別為ND~25. 5ng/L、ND~ 9ng/L、ND~19. 5ng/L和ND~8. 7ng/L。BPA、BPS、BPAF的濃度范圍分別為ND~283ng/ L、ND~10ng/L、ND~3ng/L。
[0126] 本發(fā)明還可有其它多種實(shí)施例，在不背離本發(fā)明精神及其實(shí)質(zhì)的情況下，本領(lǐng)域 技術(shù)人員當(dāng)可根據(jù)本發(fā)明作出各種相應(yīng)的改變和變形，但這些相應(yīng)的改變和變形都應(yīng)屬于 本發(fā)明所附的權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種地表水體中環(huán)境雌激素的共檢測(cè)方法，其特征在于一種地表水體中環(huán)境雌激素 的共檢測(cè)方法具體是按照以下步驟進(jìn)行的： 步驟一、樣品采集及預(yù)處理：量取地表水體原水水樣，用鹽酸酸化，加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，得到 待檢測(cè)地表水體樣品，將待檢測(cè)地表水體樣品密封保存于3-4°C的環(huán)境，并在48h內(nèi)進(jìn)行檢 測(cè)； 步驟二、過濾富集：將保存的待檢測(cè)地表水體樣品通過玻璃纖維濾膜進(jìn)行過濾，過濾后 的待檢測(cè)地表水體樣品由自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣到在線固相萃取裝置柱中，通過在線固相萃取裝 置柱進(jìn)行富集純化； 步驟三、檢測(cè)分析：采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)富集純化后的待檢測(cè)地表水體 樣品中7種環(huán)境雌激素進(jìn)行測(cè)定，得到待檢測(cè)地表水體樣品中7種環(huán)境雌激素的檢測(cè)限、定 量及定性結(jié)果； 步驟四、利用分析天平準(zhǔn)確稱量7種環(huán)境雌激素，溶于色譜純甲醇內(nèi)，配置成系列濃度 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行分析，分別以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱 坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線； 步驟五、將步驟三得到的待檢測(cè)地表水體樣品的定量及定性結(jié)果與步驟四得到的標(biāo)準(zhǔn) 曲線比較，得到地表水體中7種環(huán)境雌激素的含量及回收率； 所述一種地表水體中環(huán)境雌激素包括雌酮、17p -雌二醇、雌三醇，17a-乙炔基雌二 醇、雙酚類化合物BPA、雙酚類化合物BPS和雙酚類化合物BPAF7種環(huán)境雌激素； 雙酚類化合物BPA為雙酚A、雙酚類化合物BPS為雙酚S，雙酚類化合物BPAF為雙酚 AF〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種地表水體中環(huán)境雌激素的共檢測(cè)方法，其特征在于：所述 步驟一中樣品采集及預(yù)處理：量取地表水體原水水樣，并用鹽酸酸化，加入內(nèi)標(biāo)物