同時(shí)迅速按下緩沖液按鈕，靜置30分鐘后在酶免試紙條的檢測區(qū)觀察記錄結(jié) 果。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):若質(zhì)控線顯色即為陽性，檢測線顯色即可判為陽性，檢測線不顯色即可 判為陰性;若質(zhì)控線未顯色即為陰性，無論檢測線是否顯色，均判定為無效結(jié)果，需重測。
[0126] 由表4可知:酶免疫層析檢測試紙條1可同時(shí)檢測PEDV、TGEV兩種病毒，并且酶免疫 層析檢測試紙條1檢測PEDV的結(jié)果略差于RT-PCR檢測結(jié)果，優(yōu)于膠體金檢測試紙條1、2、3W 及安捷Bionote試紙條的檢測結(jié)果;檢測TGEV的結(jié)果略差于RT-PCR檢測結(jié)果，優(yōu)于膠體金檢 測試紙條1、3 W及現(xiàn)有技術(shù)中TGEV對(duì)比試紙條的檢測結(jié)果。
[0127] 由表5可知:酶免疫層析檢測試紙條2可同時(shí)檢測PEDV、PoRV兩種病毒，并且酶免疫 層析檢測試紙條2檢測PEDV的結(jié)果與酶免疫層析檢測試紙條1的結(jié)果相當(dāng)，略差于RT-PCR檢 測結(jié)果，優(yōu)于膠體金檢測試紙條1、2及安捷Bionote試紙條的檢測結(jié)果;檢測PoRV的結(jié)果略 差于RT-PCR檢測結(jié)果，優(yōu)于膠體金檢測試紙條2、3W及現(xiàn)有技術(shù)中化RV對(duì)比試紙條的檢測 結(jié)果。
[0128] 由表6可知：酶免疫層析檢測試紙條3可同時(shí)檢測PEDV、TGEV JoRVS種病毒，并且 酶免疫層析檢測試紙條3檢測PEDV的結(jié)果與酶免疫層析檢測試紙條1、2的結(jié)果相當(dāng)，略差于 RT-PCR檢測結(jié)果，優(yōu)于膠體金檢測試紙條1、2、3W及安捷Bionote試紙條的檢測結(jié)果;檢測 TGEV的結(jié)果與酶免疫層析檢測試紙條1的結(jié)果相當(dāng)，略差于RT-PCR檢測結(jié)果，優(yōu)于膠體金檢 測試紙條1、3W及現(xiàn)有技術(shù)中膠體金免疫層析試紙條的檢測結(jié)果;檢測化RV的結(jié)果與酶免 疫層析檢測試紙條2的結(jié)果相當(dāng)，略差于RT-PCR檢測結(jié)果，優(yōu)于膠體金檢測試紙條2、3現(xiàn)有 技術(shù)中化RV對(duì)比試紙條的檢測結(jié)果。
[0129] 綜上所述，本發(fā)明制備的膠體金檢測試紙條、酶免疫層析檢測試紙條可同時(shí)檢測 兩種或=種病毒;并且所制備的試紙條同時(shí)檢測兩種或=種病毒時(shí)所檢測各病毒的靈敏度 高于單獨(dú)檢測時(shí)的靈敏度，推測是由于多種單克隆抗體混合使用具有協(xié)同效應(yīng)。
[0130] W上全面描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但是可對(duì)它們進(jìn)行各種替代和修改。因此， 不應(yīng)參照W上描述來決定本發(fā)明的范圍，而是應(yīng)參照所附權(quán)利要求書及其全部等同物來決 定本發(fā)明的范圍。任何特征，（不論是否為優(yōu)選)均可與任何其他特征(不論是否為優(yōu)選)相 結(jié)合。本發(fā)明的權(quán)利要求書不應(yīng)被理解為具有方法+功能的限制，除非在某一權(quán)利要求中通 過術(shù)語"…的方法"明確地列舉出此類限制。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種試劑盒，其中，所述試劑盒包括有效量的抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體PEDV-McABl、PEDV-McAB2，以及用于檢測豬流行性腹瀉病毒抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑;有效量的 抗豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4，以及用于檢測豬傳染性胃腸 炎病毒抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑;和/或與有效量的抗豬輪狀病毒單克隆抗體P〇RV-McAB5、 PoRV-McAB6，以及用于檢測豬輪狀病毒抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑； 其中，所述單克隆抗體PEDV-McABl重鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID No.2,和/或輕 鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID N0.4，所述單克隆抗體PEDV-MCAB2重鏈可變區(qū)的氨基酸 序列為SEQ ID No. 6,和/或輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列為SEQ ID No. 8;所述單克隆抗體 PEDV-McABl固定在支持介質(zhì)上，所述單克隆抗體PEDV-McAB2溶解于反應(yīng)液中； 所述抗豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3與TGEV-McAB4能同時(shí)與豬傳染性 胃腸炎病毒產(chǎn)生抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，所述單克隆抗體TGEV-McAB3固定在支持介質(zhì)上，所述 單克隆抗體TGEV-McAB4溶解于反應(yīng)液中； 所述抗豬輪狀病毒單克隆抗體P〇RV-McAB5和PoRV-McAB6能同時(shí)與豬輪狀病毒產(chǎn)生抗 原抗體結(jié)合反應(yīng)，所述單克隆抗體P〇RV-McAB5固定在支持介質(zhì)上，所述單克隆抗體PoRV-McAB6溶解于反應(yīng)液中。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中，所述單克隆抗體PEDV-McABl、PEDV-McAB2可以 為嵌合單克隆抗體、改形單克隆抗體、豬源單克隆抗體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中，所述單克隆抗體PEDV-McABl、TGEV-McAB3和 PoRV-McAB5 含量為 25-1000μg/ml，所述單克隆抗體 PEDV-McAB2、TGEV-McAB4 和 PoRV-McAB6 含量為 50-2000μg/ml。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中，所述豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4分別選自下列豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4 為C7C8B2、B5G8G7、E6D9A12、1A9、1G7、1H8、1B3、3C2、4A5、1G6、2F8、3E5、2D6、E10F10D5、4E2、 802、紐4、506、4〇3、961、5〇6、207、406、6810、767、開（4)-1、幾（4)-2、開（4)-3、206，且所述單 克隆抗體TGEV-McAB3與TGEV-McAB4不同。 所述豬輪狀病毒單克隆抗體P〇RV-McAB5、P〇RV-McAB6分別選自下列豬輪狀病毒單克隆 抗體 1D5、1B5、1G9、1C7、1F10、1D11、1F3、A6、G8、H4、4B4、4E6、4C5、5G2、1E5、1F4、2E2、2H11、 4H2、4C8、4G8、5F6、4D11、2G9、6F5、2B3、1C11、C5D10、3B6，且所述單克隆抗體 PoRV-McAB5 與 PoRV-McAB6不同。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中，所述單克隆抗體TGEV-McAB3為抗豬傳染性胃腸 炎病毒單克隆抗體4E2，所述單克隆抗體TGEV-McAB4為抗豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體 JY(4)-3;所述單克隆抗體PoRV-McAB5為抗豬輪狀病毒單克隆抗體G8,所述單克隆抗體 PoRV-McAB6為抗豬輪狀病毒單克隆抗體A6。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中，所述支持介質(zhì)為滴定板、磁顆粒、乳膠顆粒、硝 酸纖維素膜中的任一種，所述用于檢測抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑可通過酶顯色、膠體金、熒 光、化學(xué)發(fā)光中的任一種方法進(jìn)行測定。7. -種試劑盒，其中，所述試劑盒包括有效量的所述單克隆抗體PEDV-McABl、PEDV-McAB2，以及用于檢測豬流行性腹瀉病毒抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑;有效量的抗豬傳染性胃 腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4,以及用于檢測豬傳染性胃腸炎病毒抗原抗 體反應(yīng)的檢測試劑;和/或與有效量的抗豬輪狀病毒單克隆抗體P〇RV-McAB5、PoRV-McAB6， 以及用于檢測豬輪狀病毒抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑； 其中，所述試劑盒包括膠體金檢測試紙條，所述膠體金檢測試紙條包括底板，所述底板 具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向上依次有濾紙、樣品墊、金標(biāo)墊、 硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜與金標(biāo)墊接觸或與樣品墊、金標(biāo)墊接觸使得抗 原與所述單克隆抗體PEDV-McAB2的結(jié)合體、抗原與所述單克隆抗體TGEV-McAB4的結(jié)合體 和/或抗原與所述單克隆抗體P〇RV-McAB6的結(jié)合體能在其上向底板第二端迀移;所述金標(biāo) 墊上含有膠體金標(biāo)記的所述單克隆抗體PEDV-McAB2、膠體金標(biāo)記的所述單克隆抗體TGEV-McAB4和/或膠體金標(biāo)記的單克隆抗體PoRV-McAB6,所述硝酸纖維素膜上包括兩條或三條檢 測線和一條質(zhì)控線，所述檢測線上分別固定化有所述單克隆抗體PEDV-McABl、TGEV-McAB3 和/或PoRV-McAB5,所述質(zhì)控線上固定化有羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗。8.-種試劑盒，其中，所述試劑盒包括有效量的所述單克隆抗體PEDV-McABl、PEDV-McAB2，以及用于檢測豬流行性腹瀉病毒抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑;有效量的抗豬傳染性胃 腸炎病毒單克隆抗體TGEV-McAB3、TGEV-McAB4,以及用于檢測豬傳染性胃腸炎病毒抗原抗 體反應(yīng)的檢測試劑;和/或有效量的抗豬輪狀病毒單克隆抗體P〇RV-McAB5、PoRV-McAB6，以 及用于檢測豬輪狀病毒抗原抗體反應(yīng)的檢測試劑； 其中，所述試劑盒包括緩沖液供應(yīng)單元和酶免疫層析檢測試紙條;所述緩沖液供應(yīng)單 元用于將緩沖液供給所述酶免疫層析檢測試紙條;所述酶免疫層析檢測試紙條包括硝酸纖 維素膜（1)，所述酶免疫層析檢測試紙條在縱向上依次包括底物供應(yīng)區(qū)、樣品供應(yīng)區(qū)、檢測 區(qū);所述底物供應(yīng)區(qū)包括底物墊(3)，其上吸附有干燥的酶底物，所述底物墊(3)與硝酸纖維 素膜(1)接觸，所述酶底物溶于緩沖液中并在硝酸纖維素膜(1)上向距所述緩沖液供應(yīng)單元 的遠(yuǎn)端迀移；所述樣品供應(yīng)區(qū)包括酶標(biāo)墊（2)，其上吸附有酶標(biāo)記所述單克隆抗體PEDV-McAB2、酶標(biāo)記所述單克隆抗體TGEV-McAB4和/或酶標(biāo)記所述單克隆抗體PoRV-McAB6,所述 酶底物能與所述單克隆抗體PEDV-McAB2、TGEV-McAB4和/或PoRV-McAB6上標(biāo)記的酶產(chǎn)生顯 色反應(yīng)，所述酶標(biāo)墊(2)與硝酸纖維素膜（1)接觸，所述單克隆抗體PEDV-McAB2、TGEV-McAB4 和/或PoRV-McAB6溶于緩沖液中并在硝酸纖維素膜（1)上向距所述緩沖液供應(yīng)單元的遠(yuǎn)端 迀移；以及所述檢測區(qū)上不同檢測線上分別固定化有所述單克隆抗體PEDV-McABl、TGEV-McAB3和/或PoRV-McAB5; 其中，所述緩沖液供應(yīng)單元包括展開液墊(5)、底物緩沖液槽(8)、底物緩沖液(9)和緩 沖液按鈕，所述底物緩沖液(9)放置于底物緩沖液槽(8)中，所述緩沖液按鈕位于底物緩沖 液槽(8)的上方，按下可將所述展開液墊(5)浸入緩沖液(9)中；所述檢測區(qū)包括檢測線(6)、 質(zhì)控線(7)，其中，所述質(zhì)控線(7)較檢測線(6)更遠(yuǎn)離所述樣品供應(yīng)區(qū)，在所述檢測線(6)分 別固定化有所述單克隆抗體PEDV-McABl、TGEV-McAB3和/或PoRV-McAB5，在所述質(zhì)控線（7) 固定化有羊抗鼠多抗或羊抗鼠二抗，且吸附在酶標(biāo)墊(2)上的酶標(biāo)記所述單克隆抗體PEDV-McAB2、TGEV-McAB4和/或PoRV-McAB6分別相對(duì)于固定在檢測線(6)的固定所述單克隆抗體 PEDV-McABl、TGEV-McAB3和/或PoRV-McAB5而言是過量的；所述硝酸纖維素膜（1)全段粘附 在所述支撐物（10)上，支撐物（10)連接所述緩沖液供應(yīng)單元，底物供應(yīng)區(qū)，樣品供應(yīng)區(qū)，檢 測區(qū)以及吸水墊（4)，所述吸水墊（4)在距所述緩沖液供應(yīng)單元的最遠(yuǎn)端；以及檢測樣品 (11)加入的位置為所述酶標(biāo)墊(2)的位置。9. 權(quán)利要求1~8中任一項(xiàng)所述的試劑盒在用于非診斷目的的豬流行性腹瀉病毒抗原、 豬傳染性胃腸炎病毒抗原和/或豬輪狀病毒抗原檢測中的應(yīng)用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，所述非診斷目的的檢測包括流行病學(xué)分析、對(duì)離體組 織進(jìn)行檢測、表位鑒定研究以及定性和定量鑒別檢驗(yàn)含豬流行性腹瀉病毒抗原、豬傳染性 胃腸炎病毒抗原和/或豬輪狀病毒抗原和其他抗原的疫苗組合物中的豬流行性腹瀉病毒抗 原、豬傳染性胃腸炎病毒抗原和/或豬輪狀病毒抗原的檢測。
【專利摘要】本發(fā)明提供了含兩個(gè)抗豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體PEDV-McAB1、PEDV-McAB2、兩個(gè)豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體、兩個(gè)抗豬輪狀病毒單克隆抗體的檢測試劑盒，該試劑盒可用于非診斷目的豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和/或豬輪狀病毒的同時(shí)檢測中的應(yīng)用，并且同時(shí)檢測兩種或三種病毒的試劑盒的檢測靈敏度高于單獨(dú)檢測一種病毒的靈敏度，避免了假陽性結(jié)果。
【IPC分類】G01N33/569, G01N33/577, G01N33/558
【公開號(hào)】CN105527437
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510948601
【發(fā)明人】田克恭, 王瑩
【申請(qǐng)人】洛陽普萊柯萬泰生物技術(shù)有限公司
【公開日】2016年4月27日
【申請(qǐng)日】2015年12月17日