養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，保留了原有品種的優(yōu)良性狀，且能有效且快速地增加玉郎傘的繁殖系數(shù)，不僅能滿足市場對玉郎傘藥材的需求，又有利于玉郎傘資源的保護。
[0106]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)之前還包括獲得無菌外植體的步驟，其中，所述獲得無菌外植體的步驟為:
[0107]步驟一、取側(cè)芽作為外植體，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為I %的洗潔精水溶液浸泡lOmin，浸泡過程中用毛筆輕輕洗刷外植體表面污垢，取出外植體后用自來水沖洗30min，再用無菌水潤洗一次，移至超凈工作臺；
[0108]步驟二、將所述步驟一中處理后的外植體在體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精中浸泡50s后，取出外植體，并將外植體置于無菌水中，之后每隔2h向無菌水中通入流量為0.2m3/min的臭氧-空氣的混合氣體，每次通入lOmin，通入6次后，取出外植體，并用無菌水沖洗5次，最后用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，得到兀菌外植體。
[0109]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述臭氧-空氣的混合氣體中，所述臭氧的濃度為 4-6mg/L。
[0110]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中，將無菌外植體在溫度為26°C，光照強度為15001UX，及光照時間為12h/d的條件下培養(yǎng)30d，誘導(dǎo)不定芽萌發(fā)，以得到無菌試管苗；
[0111]所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含WSJOg.!/1蔗糖，2.芐基腺嘌呤和5.0g噸―1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤，能夠誘導(dǎo)不定芽萌發(fā)。
[0112]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)之后進(jìn)行所述增殖培養(yǎng)，將經(jīng)過所述誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的無菌試管苗在溫度為26°C，光照強度為20001UX，及光照時間為12h/d的條件下培養(yǎng)30d，得到大量不定芽；
[0113]所述增殖培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，30g.L—1鹿糖，0.5mg.L_V芐基腺嘌呤，
1.5mg.L—1激動素，0.5mg.L ―1吲哚乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。在增殖培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤、激動素和吲哚乙酸可促進(jìn)不定芽的分化和生長。
[0114]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述增殖培養(yǎng)之后進(jìn)行所述壯苗培養(yǎng)，將經(jīng)過所述增殖培養(yǎng)得到的不定芽在溫度為26°C，光照強度為20001UX，及光照時間為12h/d的條件下培養(yǎng)21d，得到健壯植株；
[0115]所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，30g.L—1鹿糖，0.5mg.L_V芐基腺嘌呤，
0.5mg.L—1的吲哚乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。在壯苗培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤和吲哚乙酸可促進(jìn)苗壯和芽的再次增殖。
[0116]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述壯苗培養(yǎng)之后進(jìn)行所述生根培養(yǎng)，將經(jīng)過所述壯苗培養(yǎng)得到的健壯植株在溫度為26°C，光照強度為20001UX，及光照時間為12h/d的條件下培養(yǎng)21d，得到帶根苗，試管苗根長為4cm ;
[0117]所述生根培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:l/2MS，30g.L—1鹿糖，0.5mg.Li引噪乙酸，
1.0mg.L—1萘乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。在1/2MS生根培養(yǎng)基中添加吲哚乙酸和萘乙酸可獲得完整的帶根苗，經(jīng)煉苗后可直接移栽至基質(zhì)中。
[0118]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述生根培養(yǎng)之后還包括煉苗移栽的步驟，其中，所述煉苗移栽的步驟為:
[0119]步驟a、將經(jīng)過所述生根培養(yǎng)得到的帶根苗連同培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)入大棚，在溫度為27°C的條件下放置7天，然后打開瓶蓋，在培養(yǎng)瓶中加入自來水，使生根培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基全部位于水中，并繼續(xù)培養(yǎng)4天；
[0120]步驟b、設(shè)置底部橫截面為長方形的凹字型水泥墩，使得所述水泥墩沿長度方向的兩個高部的豎直高度均比低部高12cm，所述水泥墩沿長度方向的兩側(cè)外部設(shè)置水溝，所述低部沿水泥墩寬度方向設(shè)有多個凹槽，所述多個凹槽由中間向兩側(cè)直徑逐漸增大，且呈對稱分布的圓臺狀；在所述低部鋪設(shè)濾網(wǎng)，并在所述濾網(wǎng)上從下到上依次鋪設(shè)粗石塊層、細(xì)砂層，砂石層，以及塘泥、蛭石和椰糠的混合基質(zhì)層；
[0121]步驟C、洗凈所述步驟a中處理后的試管苗的根部的固體培養(yǎng)基，移栽到混合基質(zhì)層中，移栽后10天，在水泥墩上水平鋪設(shè)一層遮光率為70 %的遮陽網(wǎng)，使遮陽網(wǎng)剛好遮住混合基質(zhì)層，每天噴水I次，保持空氣濕度為90%。本實施方案中的苗床具有防止積水，利于透氣等功能，當(dāng)混合基質(zhì)層中積水，混合基質(zhì)層下的砂石層能加快混合基質(zhì)層中積水的滲入和進(jìn)行第一步過濾，中間的細(xì)砂層具有明顯過濾效果，積水中的大部分雜質(zhì)在這一層得到過濾，最下面的粗石塊層，由于中間間隙較大，對水流的阻力小，保持了過濾后的積水流通順暢，過濾后的積水比較干凈，避免了流出的積水污染環(huán)境，且低部沿寬度方向設(shè)有多個凹槽，凹槽呈對稱分布的圓臺狀，過濾后的積水會自動向下流入水溝中。水溝也利于苗床透氣，為幼苗提供生長所需的空氣。遮陽網(wǎng)由凹字型水泥墩的兩個高部支撐，與低部上的幼苗有一定間隙，這樣不會壓壞幼苗，且利于透氣。
[0122]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述混合基質(zhì)中塘泥、蛭石和椰糠體積比為3:1:1。
[0123]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)、所述增殖培養(yǎng)、所述壯苗培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)均在培養(yǎng)瓶中進(jìn)行，所述培養(yǎng)瓶的瓶口，瓶蓋及瓶口下2cm處的內(nèi)壁上均涂有光觸媒。光觸媒在光線作用下，產(chǎn)生強烈催化降解功能，能有效殺滅多種細(xì)菌，并能將細(xì)菌或真菌釋放出的毒素分解及無害化處理，能在一定程度上防止培養(yǎng)過程中的細(xì)菌污染，尤其是打開培養(yǎng)瓶，瓶蓋放置不當(dāng)造成污染等。
[0124]實施例6
[0125]一種玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)、所述增殖培養(yǎng)、所述壯苗培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)均在固體培養(yǎng)基中進(jìn)行。利用組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，保留了原有品種的優(yōu)良性狀，且能有效且快速地增加玉郎傘的繁殖系數(shù)，不僅能滿足市場對玉郎傘藥材的需求，又有利于玉郎傘資源的保護。
[0126]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)之前還包括獲得無菌外植體的步驟，其中，所述獲得無菌外植體的步驟為:
[0127]步驟一、取側(cè)芽作為外植體，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為I %的洗潔精水溶液浸泡7min，浸泡過程中用毛筆輕輕洗刷外植體表面污垢，取出外植體后用自來水沖洗22min，再用無菌水潤洗一次，移至超凈工作臺；
[0128]步驟二、將所述步驟一中處理后的外植體在體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精中浸泡40s后，取出外植體，并將外植體置于無菌水中，之后每隔l_2h向無菌水中通入流量為0.15m3/min的臭氧-空氣的混合氣體，每次通入8min，通入5次后，取出外植體，并用無菌水沖洗4次，最后用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，得到無菌外植體。
[0129]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述臭氧-空氣的混合氣體中，所述臭氧的濃度為5mg/L。
[0130]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中，將無菌外植體在溫度為25°C，光照強度為15001UX，及光照時間為llh/d的條件下培養(yǎng)30d，誘導(dǎo)不定芽萌發(fā)，以得到無菌試管苗；
[0131]所述誘導(dǎo)培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，SOgt1蔗糖，2.0mg^Ll-芐基腺嘌呤和5.0g噸―1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤，能夠誘導(dǎo)不定芽萌發(fā)。
[0132]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)之后進(jìn)行所述增殖培養(yǎng)，將經(jīng)過所述誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的無菌試管苗在溫度為25°C，光照強度為20001UX，及光照時間為llh/d的條件下培養(yǎng)30d，得到大量不定芽；
[0133]所述增殖培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，30g.L—1鹿糖，0.2mg.L_V芐基腺嘌呤，
1.0mg.L—1激動素，0.3mg.L ―1吲哚乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。在增殖培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤、激動素和吲哚乙酸可促進(jìn)不定芽的分化和生長。
[0134]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述增殖培養(yǎng)之后進(jìn)行所述壯苗培養(yǎng)，將經(jīng)過所述增殖培養(yǎng)得到的不定芽在溫度為25°C，光照強度為20001UX，及光照時間為llh/d的條件下培養(yǎng)21d，得到健壯植株；
[0135]所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，30g.L—1鹿糖，0.3mg.L_V芐基腺嘌呤，0.4mg.L—1的吲哚乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調(diào)節(jié)初始pH值為5.8。在壯苗培養(yǎng)基中添加6-芐基腺嘌呤和吲哚乙酸可促進(jìn)苗壯和芽的再次增殖。
[0136]所述的玉郎傘的組織培