養(yǎng)方法中，在所述壯苗培養(yǎng)之后進行所述生根培養(yǎng)，將經過所述壯苗培養(yǎng)得到的健壯植株在溫度為25°C，光照強度為20001UX，及光照時間為llh/d的條件下培養(yǎng)21d，得到帶根苗，試管苗根長為3cm ；
[0137]所述生根培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:l/2MS，30g.L—1鹿糖，0.3mg.Li引噪乙酸，0.5mg.L—1萘乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調節(jié)初始pH值為5.8。在1/2MS生根培養(yǎng)基中添加吲哚乙酸和萘乙酸可獲得完整的帶根苗，經煉苗后可直接移栽至基質中。
[0138]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，在所述生根培養(yǎng)之后還包括煉苗移栽的步驟，其中，所述煉苗移栽的步驟為:
[0139]步驟a、將經過所述生根培養(yǎng)得到的帶根苗連同培養(yǎng)瓶轉入大棚，在溫度為26°C的條件下放置7天，然后打開瓶蓋，在培養(yǎng)瓶中加入自來水，使生根培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基全部位于水中，并繼續(xù)培養(yǎng)3天；
[0140]步驟b、如圖1所示，設置底部橫截面為長方形的凹字型水泥墩600，使得所述水泥墩600沿長度方向的兩個高部610的豎直高度均比低部620高Ilcm，所述水泥墩600沿長度方向的兩側外部設置水溝630，所述低部620沿水泥墩寬度方向設有多個凹槽621，所述多個凹槽621由中間向兩側直徑逐漸增大，且呈對稱分布的圓臺狀；在所述低部620鋪設濾網，并在所述濾網上從下到上依次鋪設粗石塊層、細砂層，砂石層，以及塘泥、蛭石和椰糠的混合基質層；
[0141]步驟C、洗凈所述步驟a中處理后的試管苗的根部的固體培養(yǎng)基，移栽到混合基質層中，移栽后8天，在水泥墩上水平鋪設一層遮光率為65%的遮陽網，使遮陽網剛好遮住混合基質層，每天噴水I次，保持空氣濕度為87%。本實施方案中的苗床具有防止積水，利于透氣等功能，當混合基質層中積水，混合基質層下的砂石層能加快混合基質層中積水的滲入和進行第一步過濾，中間的細砂層具有明顯過濾效果，積水中的大部分雜質在這一層得到過濾，最下面的粗石塊層，由于中間間隙較大，對水流的阻力小，保持了過濾后的積水流通順暢，過濾后的積水比較干凈，避免了流出的積水污染環(huán)境，且低部沿寬度方向設有多個凹槽，凹槽呈對稱分布的圓臺狀，過濾后的積水會自動向下流入水溝中。水溝也利于苗床透氣，為幼苗提供生長所需的空氣。遮陽網由凹字型水泥墩的兩個高部支撐，與低部上的幼苗有一定間隙，這樣不會壓壞幼苗，且利于透氣。
[0142]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述混合基質中塘泥、蛭石和椰糠體積比為3:1:1。
[0143]所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法中，所述誘導培養(yǎng)、所述增殖培養(yǎng)、所述壯苗培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)均在培養(yǎng)瓶中進行，所述培養(yǎng)瓶的瓶口，瓶蓋及瓶口下2cm處的內壁上均涂有光觸媒。光觸媒在光線作用下，產生強烈催化降解功能，能有效殺滅多種細菌，并能將細菌或真菌釋放出的毒素分解及無害化處理，能在一定程度上防止培養(yǎng)過程中的細菌污染，尤其是打開培養(yǎng)瓶，瓶蓋放置不當造成污染等。
[0144]盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領域，對于熟悉本領域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。
【主權項】
1.一種玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，包括誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，所述誘導培養(yǎng)、所述增殖培養(yǎng)、所述壯苗培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)均在固體培養(yǎng)基中進行。
2.如權利要求1所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述誘導培養(yǎng)之前還包括獲得無菌外植體的步驟，其中，所述獲得無菌外植體的步驟為: 步驟一、取側芽作為外植體，用質量分數(shù)為I %的洗潔精水溶液浸泡5-10min，浸泡過程中用毛筆輕輕洗刷外植體表面污垢，取出外植體后用自來水沖洗15-30min，再用無菌水潤洗一次，移至超凈工作臺； 步驟二、將所述步驟一中處理后的外植體在體積分數(shù)為75%的酒精中浸泡30-50S后，取出外植體，并將外植體置于無菌水中，之后每隔l_2h向無菌水中通入流量為0.1-0.2m3/min的臭氧-空氣的混合氣體，每次通入6-10min，通入4_6次后，取出外植體，并用無菌水沖洗3-5次，最后用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，得到無菌外植體。
3.如權利要求2所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，所述臭氧-空氣的混合氣體中，所述臭氧的濃度為4-6mg/L。
4.如權利要求3所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，所述誘導培養(yǎng)中，將無菌外植體在溫度為24-26°C，光照強度為15001ux，及光照時間為10_12h/d的條件下培養(yǎng)30d，誘導不定芽萌發(fā)，以得到無菌試管苗； 所述誘導培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，30g.L—1蔗糖，1.5-2.5mg.L ^6-芐基腺嘌呤和5.0g.L—1瓊脂，并調節(jié)初始pH值為5.8。
5.如權利要求4所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述誘導培養(yǎng)之后進行所述增殖培養(yǎng)，將經過所述誘導培養(yǎng)得到的無菌試管苗在溫度為24-26°C，光照強度為20001ux，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)30d，得到大量不定芽； 所述增殖培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，30g.L—1蔗糖，0-0.5mg.L ^6-芐基腺嘌呤，0.5-1.5mg.L—1激動素，0.1-0.5mg.L 一1吲哚乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調節(jié)初始pH值為5.8ο
6.如權利要求5所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述增殖培養(yǎng)之后進行所述壯苗培養(yǎng)，將經過所述增殖培養(yǎng)得到的不定芽在溫度為24-26 °C，光照強度為20001UX，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)21d，得到健壯植株； 所述壯苗培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:MS，30g.L—1蔗糖，0.1-0.5mg.L ^6-芐基腺嘌呤，0.3-0.5mg.L—1的吲哚乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調節(jié)初始pH值為5.8。
7.如權利要求6所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述壯苗培養(yǎng)之后進行所述生根培養(yǎng)，將經過所述壯苗培養(yǎng)得到的健壯植株在溫度為24-26°C，光照強度為20001UX，及光照時間為10-12h/d的條件下培養(yǎng)21d，得到帶根苗，試管苗根長為2-4cm ； 所述生根培養(yǎng)中的固體培養(yǎng)基包含:l/2MS，30g.L—1蔗糖，0.1-0.5mg.L I引噪乙酸，0-1.0mg.L—1萘乙酸和5.0g.L ―1瓊脂，并調節(jié)初始pH值為5.8。
8.如權利要求7所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，在所述生根培養(yǎng)之后還包括煉苗移栽的步驟，其中，所述煉苗移栽的步驟為: 步驟a、將經過所述生根培養(yǎng)得到的帶根苗連同培養(yǎng)瓶轉入大棚，在溫度為25-27?的條件下放置7天，然后打開瓶蓋，在培養(yǎng)瓶中加入自來水，使生根培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基全部位于水中，并繼續(xù)培養(yǎng)3-4天； 步驟b、設置底部橫截面為長方形的凹字型水泥墩，使得所述水泥墩沿長度方向的兩個高部的豎直高度均比低部高10-12cm，所述水泥墩沿長度方向的兩側外部設置水溝，所述低部沿水泥墩寬度方向設有多個凹槽，所述多個凹槽由中間向兩側直徑逐漸增大，且呈對稱分布的圓臺狀；在所述低部上鋪設濾網，并在所述濾網上從下到上依次鋪設粗石塊層、細砂層，砂石層，以及塘泥、蛭石和椰糠的混合基質層； 步驟c、洗凈所述步驟a中處理后的試管苗的根部的固體培養(yǎng)基，移栽到混合基質層中，移栽后7-10天，在水泥墩上水平鋪設一層遮光率為60-70 %的遮陽網，使遮陽網剛好遮住混合基質層，每天噴水I次，保持空氣濕度為85% -90%。
9.如權利要求8所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，所述混合基質中塘泥、蛭石和椰糠體積比為3:1:1。
10.如權利要求9所述的玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，其中，所述誘導培養(yǎng)、所述增殖培養(yǎng)、所述壯苗培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)均在培養(yǎng)瓶中進行，所述培養(yǎng)瓶的瓶口，瓶蓋及瓶口下l-2cm處的內壁上均涂有光觸媒。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種玉郎傘的組織培養(yǎng)方法，包括誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)均在固體培養(yǎng)基中進行。本發(fā)明利用組織培養(yǎng)快速繁殖技術，保留了原有品種的優(yōu)良性狀，且能有效且快速地增加玉郎傘的繁殖系數(shù)，不僅能滿足市場對玉郎傘藥材的需求，又有利于玉郎傘資源的保護。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104855290
【申請?zhí)枴緾N201510278816
【發(fā)明人】潘麗梅, 白隆華, 韋榮昌, 馬小軍, 馮世鑫, 黃芩芬
【申請人】廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年5月27日