。所述的自溶性微針透皮貼片中的每根 微針的截面形狀是圓錐形或多面錐形。上述的自溶性微針透皮貼片的形狀和規(guī)格賦予其較 好的機(jī)械強(qiáng)度，刺穿皮膚時(shí)不易斷裂。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述的疫苗可以選自減毒活疫苗、亞單位疫苗、多 糖-蛋白質(zhì)偶聯(lián)疫苗、DNA疫苗、病毒載體疫苗中的一種。
[0017] 本發(fā)明中所述的減毒活疫苗是將病原微生物（細(xì)菌或病毒）在人工訓(xùn)育的條件 下，促使病原微生物產(chǎn)生定向變異，使其極大程度地喪失致病性，但仍保留一定的剩余毒 力、免疫原性和繁衍能力。優(yōu)先選自麻疹疫苗、風(fēng)疹疫苗、腮腺炎疫苗、卡介苗、乙腦減毒活 疫苗、手足口疫苗中的一種。
[0018] 本發(fā)明中所述的亞單位疫苗是從細(xì)菌或病毒培養(yǎng)物中，以生物化學(xué)和物理方法提 取純化有效特異性抗原制成的疫苗，或者是通過(guò)基因工程菌表達(dá)純化有效特異性抗原制成 的疫苗。優(yōu)先選用乙肝疫苗或流感疫苗。
[0019] 本發(fā)明中所述的多糖-蛋白質(zhì)偶聯(lián)疫苗是由長(zhǎng)鏈糖分子構(gòu)成，如細(xì)菌的多糖莢 膜。優(yōu)先選自肺炎球菌疫苗、A群流腦疫苗、A+C群流腦疫苗中的一種。
[0020] 本發(fā)明中所述的DNA疫苗是將編碼某一種病原生物特異抗原的基因插入到DNA載 體上，獲得的具有疫苗性質(zhì)的DNA疫苗。優(yōu)先選擇表達(dá)乙型肝炎表面抗原基因（S)的DNA 疫苗。
[0021] 本發(fā)明中所述的病毒載體疫苗是將遺傳改造的重組病毒作為載體，再?gòu)哪骋徊≡?生物中獲得一段特定的基因，將獲得的一段特定的基因插入到重組病毒載體中，獲得的具 有疫苗性質(zhì)的重組活病毒疫苗。所述的重組活病毒疫苗優(yōu)先選用痘病毒載體疫苗或腺病毒 載體疫苗。所述的痘病毒載體疫苗優(yōu)先選用表達(dá)乙型肝炎表面抗原基因（S)的痘病毒載 體疫苗；所述的腺病毒載體疫苗優(yōu)先選用表達(dá)乙型肝炎表面抗原基因（S)的腺病毒載體疫 苗。
[0022] 本發(fā)明的自溶性微針透皮貼片的制備方法包括以下步驟：
[0023] (1)制備含有疫苗和疫苗保護(hù)劑的水溶液；
[0024] (2)制備含有微針基質(zhì)材料和疫苗佐劑的水溶液；
[0025] (3)將步驟⑴制備的含有疫苗和疫苗保護(hù)劑的水溶液澆注到含有微孔陣列的模 具上；使步驟（1)制備的含有疫苗和疫苗保護(hù)劑的水溶液填充到模具上的微孔中；干燥澆 注的含有疫苗和疫苗保護(hù)劑的水溶液；
[0026] (4)將步驟（2)制備的含有微針基質(zhì)材料和疫苗佐劑的水溶液澆注到步驟（3)干 燥后的模具上；使步驟（2)制備的含有微針基質(zhì)材料和疫苗佐劑的水溶液填充到含有疫苗 和疫苗保護(hù)劑的水溶液干燥后塌陷出的微孔中；干燥澆注的含有微針基質(zhì)材料和疫苗佐劑 的水溶液，在含有微孔陣列的模具中得到自溶性微針透皮貼片；從所述的模具上剝離干燥 后的自溶性微針透皮貼片。
[0027] 所述的含有微孔陣列的模具是由聚二甲基硅氧烷制備而成的板，其每平方厘米表 面含有16~484個(gè)微孔陣列（優(yōu)選地，每平方厘米表面含有36~256個(gè)微孔陣列），微孔 的高度在150~1000微米之間（優(yōu)選地，微孔的高度為300~800微米），孔尖的直徑在 100納米~20微米之間（優(yōu)選地，孔尖的直徑為500納米~10微米），微孔的最大截面的 錐角是20~60度（優(yōu)選地，微孔的最大截面的錐角是30~50度）。
[0028] 所述的每個(gè)微孔的截面形狀是圓錐形或多面錐形。
[0029] 所述的步驟（3)和步驟（4)可以通過(guò)離心力或壓力實(shí)施。
[0030] 所述的含有疫苗和疫苗保護(hù)劑的水溶液的配制及使用，是按照得到的疫苗在所 述的自溶性微針透皮貼片中所占的百分含量為總重量的0.001 %~10%，疫苗保護(hù)劑在 所述的自溶性微針透皮貼片中所占的百分含量為總重量的0.01 %~30%進(jìn)行配制及使 用（優(yōu)選地，是按照得到的疫苗在所述的自溶性微針透皮貼片中所占的百分含量為總重量 的0. 01 %~1 %，疫苗保護(hù)劑在所述的自溶性微針透皮貼片中所占的百分含量為總重量的 0. 1 %~20%進(jìn)行配制及使用）。
[0031] 所述的含有微針基質(zhì)材料和疫苗佐劑的水溶液的配制及使用，是按照得到的微針 基質(zhì)材料和疫苗佐劑在所述的自溶性微針透皮貼片中所占的百分含量為總重量的60%~ 99. 98%進(jìn)行配制及使用（優(yōu)選地，是按照得到的微針基質(zhì)材料和疫苗佐劑在所述的自溶 性微針透皮貼片中所占的百分含量為總重量的80%~99. 8%進(jìn)行配制及使用）。
[0032] 本發(fā)明通過(guò)將內(nèi)源性的寡聚透明質(zhì)酸和/或低分子量硫酸乙酰肝素同時(shí)作為微 針基質(zhì)材料和疫苗佐劑制備自溶性微針，并將疫苗負(fù)載于其中，從而獲得本發(fā)明的自溶性 微針疫苗透皮貼片。本發(fā)明的自溶性微針透皮貼片可實(shí)現(xiàn)疫苗的有效經(jīng)皮免疫，增強(qiáng)疫苗 的體液免疫應(yīng)答。并且與現(xiàn)有肌肉注射免疫以及其他自溶性微針經(jīng)皮免疫相比，能夠顯著 增強(qiáng)疫苗的細(xì)胞免疫應(yīng)答。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果：1)與注射免疫相 t匕，微針作用于皮膚無(wú)痛感，不會(huì)留下感染點(diǎn)，可自行接種，無(wú)需專(zhuān)業(yè)人員操作；2)寡聚透 明質(zhì)酸和/或低分子量硫酸乙酰肝素作為基質(zhì)材料的同時(shí)又作為佐劑，避免了佐劑的額外 添加帶來(lái)的成本增加以及微針的成型性和機(jī)械強(qiáng)度變差的問(wèn)題；3)寡聚透明質(zhì)酸和/或低 分子量硫酸乙酰肝素是內(nèi)源性物質(zhì)，在免疫劑量范圍內(nèi)是安全可靠的；4)寡聚透明質(zhì)酸和 /或低分子量硫酸乙酰肝素作為疫苗佐劑，不僅能誘導(dǎo)抗原特異性的體液免疫應(yīng)答，而且能 誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，明顯優(yōu)于鋁佐劑。
【附圖說(shuō)明】
[0033] 圖1.本發(fā)明實(shí)施例1的三棱錐形自溶性微針。
[0034] 圖2.本發(fā)明實(shí)施例2的圓錐形自溶性微針。
[0035] 圖3.本發(fā)明實(shí)施例4的自溶性微針硬度測(cè)試。
[0036] 圖4.本發(fā)明實(shí)施例5的負(fù)載乙肝表面抗原的寡聚透明質(zhì)酸微針經(jīng)皮免疫誘導(dǎo)的 血清抗_HBsIgG水平。
[0037] 圖5.本發(fā)明實(shí)施例6的負(fù)載乙肝DNA疫苗VR-S2S的低分子量的硫酸乙酰肝素微 針經(jīng)皮免疫誘導(dǎo)的血清抗-HBsIgG水平。
[0038] 圖6.本發(fā)明實(shí)施例7的負(fù)載重組腺病毒載體乙肝疫苗rMVA_E4的寡聚透明質(zhì)酸 /低分子量的硫酸乙酰肝素微針經(jīng)皮免疫誘導(dǎo)的血清抗-HBsIgG水平。
【具體實(shí)施方式】
[0039] 以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明 本發(fā)明而非限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體要求作進(jìn)一步 的調(diào)整，未注明的實(shí)施條件通常為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。實(shí)施例1制作以乙肝表面抗原HBsAg 為代表的亞單位疫苗自溶性微針透皮貼片
[0040] (1)模具的制備：依托表面有36個(gè)（6X6行）高約650微米的微針，微針的最大截 面的錐角為35度，底座面積為0. 5cmX0. 5cm的四棱錐形不銹鋼母模模具，取預(yù)聚合的聚二 甲基石圭氧燒10克和交聯(lián)劑1克的混合物（SYLGARD184,siliconeelastomer,Dowcorning) 并覆蓋在母模模具上，在溫度為80°C下放置30分鐘左右，得到表面具有與所述的母模模具 上微針針體的形狀和數(shù)量相適配的所需數(shù)量的針孔的模具；
[0041] (2)將5毫克負(fù)載有5微克臺(tái)盤(pán)蘭（使用臺(tái)盤(pán)蘭是為了將目標(biāo)藥物在自溶性微針 中的分布可視化）的HBsAg的PBS溶液與5毫克10重量％的海藻糖溶液混合均勻，將上述 混合溶液覆蓋到步驟（1)得到的表面有針孔的模具中，在封閉容器中加2個(gè)大氣壓10分 鐘，使所述的溶液進(jìn)入到針孔中，將上述模具放于干燥器中，4°C條件下晾干；
[0042] (3)將寡聚透明質(zhì)酸按照45重量％溶解到水中，作為基質(zhì)材料制作液，然后將0. 1 克該基質(zhì)材料制作液倒入步驟（2)干燥后得到的負(fù)載有臺(tái)盤(pán)蘭、HBsAg與海藻糖的塌陷出 的針孔中，置于密閉容器中，在模具上方施加2個(gè)大氣壓，維持10分鐘，使所述的針孔中殘 存的空氣溢出；然后將覆蓋有基質(zhì)材料制作液的模具于干燥器中4°C條件下晾干，將干燥 后的自溶性微針疫苗貼片取下，得到含寡聚透明質(zhì)酸的自溶性微針疫苗貼片（如圖1所 示），自溶性微針針體的高度是650微米，針尖的角度是35度；其中臺(tái)盤(pán)蘭基本分布在每一 根微針的針體部分，背襯層基本不含有臺(tái)盤(pán)蘭。所得的自溶性微針疫苗貼片中含疫苗5微 克，疫苗保護(hù)劑（海藻糖）〇. 5毫克，微針基質(zhì)材料（寡聚透明質(zhì)酸）45毫克。
[0043] 本實(shí)施例中選用的寡聚透明質(zhì)酸的重均分子量為5000,由山東福瑞達(dá)生物醫(yī)藥有 限公司提供。本實(shí)施例中使用的乙肝表面抗原由大連漢信生物制藥有限公司提供。
[0044] 實(shí)施例2制作以表達(dá)乙型肝炎表面抗原基因⑶的DNA疫苗VR-S2S為代表的DNA 疫苗自溶性微針透皮貼片
[0045] (1)模具的制備：依托表面有81個(gè)（9X9行）高約500微米的微針，微針的最大 截面的錐角為30度，底座面積為0. 5cmX0. 5cm的圓錐形不銹鋼母模模具，取預(yù)聚合的聚二 甲基石圭氧燒10克和交聯(lián)劑1克的混合物（SYLGARD184,siliconeelastomer,Dowcorning) 并覆蓋在母模模具上，在溫度為80°C下放置30分鐘左右，得到表面具有與所述的母模模具 上微針針體的形狀和數(shù)量相適配的所需數(shù)量的針孔的模具；
[0046] (2)將10毫克負(fù)載有10微克臺(tái)盤(pán)蘭（使用臺(tái)盤(pán)蘭是為了將目標(biāo)藥物在自溶性微 針中的分布可視化）的VR-S2S的PBS溶液與10毫克20重量％的海藻糖溶液混合均勻，將 上述溶液覆蓋到步驟（1)得到的表面有針孔的模具中，在封閉容器中加2個(gè)大氣壓10分 鐘，使針體制作液