)-煙堿(接近最大有效濃度）刺激的應(yīng)答 進(jìn)行對(duì)比。完整濃度-效應(yīng)曲線產(chǎn)生每種配體的效能巧CJ和效力（EmJ。通過(guò)將所述配 體與100μΜ(-)-煙堿同時(shí)應(yīng)用于細(xì)胞，確定每種配體的括抗劑活性。在8種濃度測(cè)試了每 種配體的括抗劑活性。從完整濃度-效應(yīng)曲線導(dǎo)出每種配體作為括抗劑的效能（ICwDi>)。 通過(guò)在應(yīng)用ιοομΜ(-)-煙堿之前10分鐘用測(cè)試化合物預(yù)處理細(xì)胞，確定每種配體的脫敏 效能。使用至少8種配體濃度，用完整濃度-效應(yīng)曲線得到10分鐘暴露W后配體將受體脫 敏的效能（ICwi<n)。盡管主要使用86化+流出測(cè)定來(lái)確定功能性質(zhì)，但是還使用全細(xì)胞電 流測(cè)量來(lái)驗(yàn)證關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)。關(guān)于所述化合物將兩種主要受體（ICwi<n)亞型α3β4和α4β2 脫敏的效能，參見(jiàn)下表1。ND指示沒(méi)有檢測(cè)到顯著的刺激流出。
[0140] 對(duì)nA化R功能的體外作用.選擇在結(jié)合測(cè)定中表現(xiàn)出對(duì)α4β2nA化R的高結(jié)合 親合力和對(duì)該亞型超過(guò)α3β4和α7受體的高選擇性的新化合物用于功能研究（表2)。 如下評(píng)估它們的激動(dòng)劑活性：測(cè)量來(lái)自穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的刺激的86化+流出，所述細(xì)胞表達(dá) 人α4β2nAChR或大鼠α3β4受體。如下確定它們的將兩種nAChR亞型脫敏的能力：在 將細(xì)胞與測(cè)試化合物一起預(yù)溫育10分鐘W后，測(cè)量煙堿刺激的86化+流出。為了對(duì)比，在 實(shí)驗(yàn)中包括煙堿、伐尼克蘭和Sazetidine-A。
[014。 如預(yù)期的，煙堿在人α4β2和大鼠α3β4nA化R處表現(xiàn)出完全激動(dòng)劑活性（表 2)。與W前的報(bào)道相一致，與（-)-煙堿的效力相比，伐尼克蘭在刺激從表達(dá)α40 2nA化R的細(xì)胞流出中具有45%的效力，在刺激從表達(dá)α3β4nA化R的細(xì)胞流出中具有90%的效力。 Sazetidine-A表現(xiàn)出比伐尼克蘭稍微更低的對(duì)α40 2nAChR的效力。相反，Sazetidine-A 對(duì)α3β4nAChR的激動(dòng)劑活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于（-)-煙堿和伐尼克蘭的激動(dòng)劑活性。與開發(fā)該 系列新配體的目的相一致，所有測(cè)試的化合物在兩種受體亞型處表現(xiàn)出比Sazetidine-A 低得多的激動(dòng)劑活性。（S) -15和（S) -28在α4β2nA化R處具有小于33%的激動(dòng)劑效力。 (S)-15和（S)-28在所述受體亞型處沒(méi)有表現(xiàn)出可檢測(cè)的激動(dòng)劑活性。實(shí)際上，所有化合物 在α30 4nA化R處沒(méi)有表現(xiàn)出可檢測(cè)的激動(dòng)劑活性。
[0142] 如預(yù)期的，（-)-煙堿、伐尼克蘭和Sazetidine-A有效地和選擇性地將α4β2 ηΑ化R脫敏，具有在ηΜ范圍內(nèi)的ICsw。,誰(shuí)（表。。做-15和做-28維持選擇性地將α4β2 nAChR脫敏的能力。它們的將α4β2nAChR脫敏的ICs。。。,)值是260ηΜ側(cè)于做-15)和 35ηΜ(對(duì)于（S)-28)，考慮到它們的結(jié)構(gòu)相似性，運(yùn)是一個(gè)意外大的改善。它們將α30 4 nAChR脫敏的ICwi〇,>值是9,200ηΜ和6,000ηΜ。重要的是，與Sazetidine-A相比，化合 物（S)-28在α30 4受體處展示出激動(dòng)劑效力巧mJ的顯著改善。盡管Sazetidine-A展 示出96%的Emax，（巧-28僅產(chǎn)生26%效力。
[0143] 表2.配體對(duì)nA化R功能的活化和脫敏的對(duì)比
[0144] 實(shí)施例3 化合物的設(shè)計(jì)和合成.可W通過(guò)可用于制備類似化合物且在下面實(shí)施例中描述的任 何常規(guī)方法制備本發(fā)明的化合物。
[0145] 用于本專利申請(qǐng)中描述的方法的起始原料是已知的，或可W通過(guò)已知方法從商購(gòu) 可得的材料制備。
[0146] 使用常規(guī)方法，可W將本發(fā)明的化合物轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的另一種化合物。
[0147] 通過(guò)常規(guī)方式諸如萃取、結(jié)晶、蒸饋、色譜法等，分離本文描述的反應(yīng)的產(chǎn)物。
[0148] 通過(guò)在下文中描述的一般方法，可W制備本發(fā)明的煙堿性A化受體配體的例子。 用于制備本文所述化合物的化學(xué)反應(yīng)的一般順序顯示在圖1和2中。
[0149] 一般化學(xué)方法.除非另外指出，否則所有溶劑和試劑W從商業(yè)來(lái)源得到的狀態(tài) 使用。所有起始原料也得自商業(yè)來(lái)源。除非另外指出，否則所有反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。將 有機(jī)相用水、鹽水洗涂，經(jīng)無(wú)水Na2S〇4干燥和在40°C在減壓下蒸發(fā)（標(biāo)準(zhǔn)后處理）。在 Varian-400波譜儀(對(duì)于化其運(yùn)行在400MHz;對(duì)于"C，其運(yùn)行在100MHz)上記錄電和 "CNMR譜。使用気代氯仿巧9. 8%D)作為溶劑。古化學(xué)位移值（5)，距離作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品 的四甲基硅烷。"C化學(xué)位移（δ)是參考作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品的CDC13 (中央峰，5=77.00 ppm)。在得自Beilin曲am&StanleyLimited的ADP220自動(dòng)旋光計(jì)上檢測(cè)旋光度。W陽(yáng) 模式電噴射電離（ESI)測(cè)量質(zhì)譜圖。在WatersQ-T0FPremier質(zhì)譜儀上得到HRMS數(shù)據(jù)。 在硅膠60F254塑料片上進(jìn)行化C。使用硅膠（35-75目）進(jìn)行柱色譜分析。由Atlantic Microl油S,Inc.Norcross,Ga執(zhí)行燃燒分析。
[0150]Mitsunobu反應(yīng)的一般程序.在0°C在氮?dú)夥障孪騈-Boc保護(hù)的醇（1. 0當(dāng)量）、 5-面素-3-化晚醇（1. 0當(dāng)量）和化3P(1. 3當(dāng)量）在無(wú)水THF(0. 1M)中的混合物中逐 滴加入DEAD(1.3當(dāng)量）。在室溫?cái)埌?天W后，在減壓下除去溶劑。使用己燒-乙酸乙醋 梯度（10:1至5:1)作為洗脫液通過(guò)硅膠上的柱色譜法純化殘余物，W68%-90%收率得到產(chǎn) 物。
[0151]Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)的一般程序（方法A).將Mitsunobu加成化合物（1當(dāng) 量）、烘控（4當(dāng)量）、Pd腫}13)2化化05當(dāng)量）、cul(0.1當(dāng)量）、PPh3(0.1當(dāng)量）在EtjN/DMSO(10:1，0.12Μ)中的混合物在氮?dú)夥障略谑覝財(cái)埌柽^(guò)夜。將反應(yīng)混合物溶解于乙酸 乙醋中，并將有機(jī)相用水、鹽水洗涂，然后經(jīng)Na2S〇4干燥。將萃取物在減壓下濃縮，并使用 CH2CI2-乙酸乙醋梯度（16:1至10:1)作為洗脫液通過(guò)硅膠上的柱色譜法純化殘余物，W 88- 98%收率得到產(chǎn)物。
[0152]Sonogashira偶聯(lián)反應(yīng)的一般程序（方法B).在氮?dú)夥障略诿荛]試管中將 Mitsunobu加成化合物（1 當(dāng)量）、烘控（4 當(dāng)量）、Pd(PI%3)2Cl2(0. 05 當(dāng)量）、Cul(0. 1 當(dāng) 量）、PPh3(0. 1當(dāng)量）在化3N/DMSO(10:1，0. 12M)中的混合物加熱至95°C保持60h。將 冷卻的反應(yīng)混合物溶解于乙酸乙醋中，并將有機(jī)相用水、鹽水洗涂，然后經(jīng)Na2S〇4干燥。將 萃取物在減壓下濃縮，并使用CH2CI2-乙酸乙醋梯度（16:1至10:1)作為洗脫液通過(guò)硅膠上 的柱色譜法純化殘余物，W88- 98%收率得到產(chǎn)物。
[015引 N-Boc基團(tuán)的去保護(hù)的一般程序（方法C).在0°C在氮?dú)夥障孪騍onogashira加 成化合物（1當(dāng)量）在二氯甲燒（0. 1M)中的攬拌溶液中逐滴加入Ξ氣乙酸（32當(dāng)量）。將 反應(yīng)混合物在室溫?cái)埌?h。然后在減壓下除去溶劑和多余的TFA。在0°C向殘余物中加入 2-3血甲醇，隨后逐滴加入10%Na0H水溶液，直到混合物的抑為9 - 10。將混合物在室溫 攬拌30分鐘W后，將溶液溶解于二氯甲燒中，并將有機(jī)相用鹽水洗涂，經(jīng)Na2S04干燥。將 萃取物在減壓下濃縮。使用CH2CI2-甲醇梯度（20:1至10:1)作為洗脫液，通過(guò)硅膠上的柱 色譜法純化殘余物，W75 - 83%收率得到產(chǎn)物。
[0154]N-Boc基團(tuán)的去保護(hù)的一般程序（方法D).在0°C在氮?dú)夥障孪駼oc保護(hù)的化合 物（1mmol)中加入2Μ的肥1在甲醇中的溶液（10mL)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭?拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓下濃縮，并使用CH2CI2-甲醇梯度（10:1至5:1)作為洗脫 液通過(guò)硅膠上的柱色譜法純化殘余物，W73 - 92%收率得到作為白色固體的產(chǎn)物。
[0155] (S)-2-((5-漠-2-甲基化晚-3-基氧基）甲基）氮雜環(huán)下燒-1-甲酸叔下醋 (做-7).收率：69% (淺紅色固體）。古NMR(CDCI3，400MHz) :δ8.15 (s,IH), 7.26 (s,IH), 4.52 (m,IH), 4.33 (m,IH), 4.05 (m, IH), 3.90 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2. 34(m,2H), 1.41 (s, 9H)。
[0156] (R)-2-((5-漠-2-甲基化晚-3-基氧基）甲基）氮雜環(huán)下燒-1-甲酸叔下醋 (佩-7).收率：77%(淺紅色固體）。iHNMR(CDCI3，400MHz):δ8. 16(S,1H),7.26 (s,IH), 4.53 (m,IH), 4.34 (m,IH), 4.06 (m, IH), 3.91 (m, 2Η), 2.45 (s, 3Η), 2. 35(m,2H), 1.42 (s, 9H)。
[0157] (巧-2-(巧-(己-1-烘基）-2-甲基化晚-3-基氧基）甲基）氮雜環(huán)下燒-1-甲 酸叔下醋（做-11).使用方法B。收率：95% (淺黃色油）。古NMR(CDCI3，400MHz): δ 8. 12(d, IH,J=1.2Hz), 7. 10(d,IH,J= 1.2 Hz), 4. 52 (m, IH), 4. 32 (m, IH), 4.05(dd,IH,J=10，2.8Hz), 3.90(m,2H), 2.48 (s, 3H), 2.41 扣 2H,J=7. 2Hz), 2.33(m,2H), 1.59(m,2H), 1.48(m,2H), 1.41 (s, 9H), 0.95 扣 3H,J= 7. 2Hz)。
[0158] (R)-2-(巧-(己-1-烘基）-2-甲基化晚-3-基氧基）甲基）氮雜環(huán)下燒-1-甲 酸叔下醋（佩-11).使用方法B。收率：93%(淺黃色油）。iHNMR(CDCI3，400MHz): δ 8. 10 (d, IH,J=1.2Hz), 7.09 (d,IH,J= 1.2 Hz), 4. 50 (m, IH), 4. 30 (m, IH), 4. 03 (dd, IH, J= 10，2. 8Hz)，3.89 (m, 2H)，2.46 (s,甜)，2. 39 扣甜，J= 7. 2 Hz), 2.31 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 1.46 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 0.94 扣 3H,J= 7. 2Hz)。
[0159] 做-3-(氮雜環(huán)下燒-2-基甲氧基）-5-(己-1-烘基）-2-甲基化晚（做-15) (Ykl-127).收率：83%(淺紅色油）。iHNMR(CDCI3，400MHz):δ8.08 化 1H,J= 1.6 Hz), 7.04 (d, IH, J= 1.6Hz), 4.25 (m,IH), 3.96 (m, 2H), 3.67 (m,IH), 3.47 (m, IH), 2.42 (s, 3H), 2.38 (m, 4H), 2.23 (m, IH), 1.57 (m, 2H), 1.46 (m, 2H), 0.92 (t, 3H, J= 7. 2Hz)〇"CNMR(CDCI3，lOOMHz):δ 152. 3，148.0，143. 1， 119.7, 118.8, 92.7, 77.4, 72.4, 57.1, 44.3, 30.6, 23.9, 22.0, 19.2, 19.1, 13. 5. (：16&2成0 (Μ + ΗΓ的HRMS巧SI) m/z計(jì)算值259. 1810,實(shí)測(cè)值259. 1813; [α]〇24 =-4. 3 (c = 0. 77，CHCls)。CifftzNzO.O. 625&0的分析計(jì)算值：C，71. 28 ;Η，8. 69 ;Ν，10. 39。 實(shí)測(cè)值：C，71. 59 ;Η，8. 56 ;Ν，10. 06。
[0160] (R) -3-(氮雜環(huán)下燒-2-基甲氧基）-5-(己-1-烘基）-2-甲基化晚（(R) -15) (Ykl-171).收率：75〇/〇(淺紅色油）。古NMR(CDCI3，400MHz):δ8. 07 化 1Η,J= 1.6 Hz), 7.04 (d, IH, J= 1.6Hz), 4.24 (m,IH), 3.94 (m, 2H), 3.66 (m,IH), 3.45 (m, IH), 2.41 (s, 3H), 2.36 (m, 3H), 2.24 (m, 2H), 1.56 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 0.92 (t, 3H, J= 7. 2Hz)〇"CNMR(CDCI3，lOOMHz):δ 152. 3，148.0，143. 1， 119.7, 118.8, 92.7, 77.4, 72.5, 57.