一種檢測(cè)人乳頭瘤病毒及病毒分型的試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測(cè)人乳頭瘤病毒及病毒分型的試劑盒及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 子宮頸癌(又稱宮頸癌)是威脅婦女健康的主要疾病之一。發(fā)病率在女性惡性腫瘤 中居第二位，僅次于乳腺癌。現(xiàn)認(rèn)為宮頸癌是全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題，也是發(fā)展中國(guó)家最常見(jiàn) 的癌癥。據(jù)WHO報(bào)道，2005年有超過(guò)50萬(wàn)的宮頸癌新發(fā)病例，90%來(lái)自發(fā)展中國(guó)家。在已 建立了篩查制度的發(fā)達(dá)國(guó)家和一些發(fā)展中國(guó)家的流行病學(xué)資料顯示，子宮頸浸潤(rùn)癌的發(fā)病 率和死亡率已經(jīng)大幅度下降。
[0003] 對(duì)宮頸癌發(fā)病病因的研究表明，人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV)高危 型持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的必要因素。人乳頭瘤病毒是小型雙鏈DNA病毒，主要引起 高級(jí)脊椎動(dòng)物的上皮細(xì)胞發(fā)生增殖以及乳頭瘤樣改變。依據(jù)宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)性高低將 HPV分為：低危型HPV(如HPV-6、HPV-11、HPV-70、HPV-81 等）和高危型HPV(如HPV-16、 HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-53、HPV-56、HPV-58、 HPV-59、HPV-66、HPV-68 等）。
[0004] 盡管多數(shù)高危型HPV感染是一過(guò)性的，病毒約經(jīng)6~8個(gè)月后可被清除，但仍有少 部分患者（4%)體內(nèi)的HPV病毒不能被清除，感染呈持續(xù)性，這將導(dǎo)致上皮內(nèi)瘤變（CIN)持續(xù) 存在或進(jìn)一步發(fā)展為宮頸癌。從高危型HPV感染開(kāi)始至發(fā)展為宮頸癌的時(shí)間間隔為15年， 因此早期篩查和清除HPV感染可有效地預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。
[0005] 核酸檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、特異性高、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛用于臨床檢測(cè)。 但是普通的PCR方法和熒光定量PCR由于檢測(cè)通量的局限性不能滿足臨床HPV分型的需 求。隨著越來(lái)越多高危型HPV的確定，必須建立一種能夠同時(shí)檢測(cè)多種HPV的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)人乳頭瘤病毒的試劑盒及其應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明首先提供了一種引物組，包括22個(gè)引物對(duì)中的至少1個(gè)引物對(duì)；所述 22個(gè)引物對(duì)為引物對(duì)HPV-6A、引物對(duì)HPV-11A、引物對(duì)HPV-16A、引物對(duì)HPV-18A、引物 對(duì)HPV-26A、引物對(duì)HPV-31A、引物對(duì)HPV-33A、引物對(duì)HPV-35A、引物對(duì)HPV-39A、引物 對(duì)HPV-45A、引物對(duì)HPV-51A、引物對(duì)HPV-52A、引物對(duì)HPV-53A、引物對(duì)HPV-56A、引物 對(duì)HPV-58A、引物對(duì)HPV-59A、引物對(duì)HPV-66A、引物對(duì)HPV-68A、引物對(duì)HPV-70A、引物對(duì) HPV-73A、引物對(duì)HPV-81A和引物對(duì)HPV-82A;
[0008] 所述引物對(duì)HPV-6A(用于鑒定HPV-6)由序列表的序列1自5'末端第23-45位核 苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成；
[0009] 所述引物對(duì)HPV-11A(用于鑒定HPV-11)由序列表的序列3自5'末端第22-44位 核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子組成；
[0010] 所述引物對(duì)HPV-16A(用于鑒定HPV-16)由序列表的序列5自5'末端第21-45位 核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列6所示的單鏈DNA分子組成；
[0011] 所述引物對(duì)HPV-18A(用于鑒定HPV-18)由序列表的序列7自5'末端第24-44位 核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列8所示的單鏈DNA分子組成；
[0012] 所述引物對(duì)HPV-26A(用于鑒定HPV-26)由序列表的序列9自5'末端第21-40位 核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列10所示的單鏈DNA分子組成；
[0013] 所述引物對(duì)HPV-31A(用于鑒定HPV-31)由序列表的序列11自5'末端第24-46 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列12所示的單鏈DNA分子組成；
[0014] 所述引物對(duì)HPV-33A(用于鑒定HPV-33)由序列表的序列13自5'末端第24-47 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列14所示的單鏈DNA分子組成；
[0015] 所述引物對(duì)HPV-35A(用于鑒定HPV-35)由序列表的序列15自5'末端第21-42 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列16所示的單鏈DNA分子組成；
[0016] 所述引物對(duì)HPV-39A(用于鑒定HPV-39)由序列表的序列17自5'末端第21-45 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列18所示的單鏈DNA分子組成；
[0017] 所述引物對(duì)HPV-45A(用于鑒定HPV-45)由序列表的序列19自5'末端第21-42 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列20所示的單鏈DNA分子組成；
[0018] 所述引物對(duì)HPV-51A(用于鑒定HPV-51)由序列表的序列21自5'末端第21-42 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列22所示的單鏈DNA分子組成；
[0019] 所述引物對(duì)HPV-52A(用于鑒定HPV-52)由序列表的序列23自5'末端第21-39 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列24所示的單鏈DNA分子組成；
[0020] 所述引物對(duì)HPV-53A(用于鑒定HPV-53)由序列表的序列25自5'末端第21-41 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列26所示的單鏈DNA分子組成；
[0021] 所述引物對(duì)HPV-56A(用于鑒定HPV-56)由序列表的序列27自5'末端第21-42 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列28所示的單鏈DNA分子組成；
[0022] 所述引物對(duì)HPV-58A(用于鑒定HPV-58)由序列表的序列29自5'末端第21-44 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列30所示的單鏈DNA分子組成；
[0023] 所述引物對(duì)HPV-59A(用于鑒定HPV-59)由序列表的序列31自5'末端第21-43 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列32所示的單鏈DNA分子組成；
[0024] 所述引物對(duì)HPV-66A(用于鑒定HPV-66)由序列表的序列33自5'末端第21-44 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列34所示的單鏈DNA分子組成；
[0025] 所述引物對(duì)HPV-68A(用于鑒定HPV-68)由序列表的序列35自5'末端第21-47 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列36所示的單鏈DNA分子組成；
[0026] 所述引物對(duì)HPV-70A(用于鑒定HPV-70)由序列表的序列37自5'末端第22-40 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列38所示的單鏈DNA分子組成；
[0027] 所述引物對(duì)HPV-73A(用于鑒定HPV-73)由序列表的序列39自5'末端第21-43 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列40所示的單鏈DNA分子組成；
[0028] 所述引物對(duì)HPV-81A(用于鑒定HPV-81)由序列表的序列41自5'末端第21-41 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列36所示的單鏈DNA分子組成；
[0029] 所述引物對(duì)HPV-82A(用于鑒定HPV-82)由序列表的序列42自5'末端第21-42 位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序列43所示的單鏈DNA分子組成。
[0030] 所述引物組具體可由所述22個(gè)引物對(duì)組成。所述引物組可由引物組合物甲和 引物組合物乙組成；所述引物組合物甲由所述引物對(duì)HPV-6A、所述引物對(duì)HPV-11A、所述 引物對(duì)HPV-18A、所述引物對(duì)HPV-26A、所述引物對(duì)HPV-31A、所述引物對(duì)HPV-33A、所述引 物對(duì)HPV-39A、所述引物對(duì)HPV-45A、所述引物對(duì)HPV-51A、所述引物對(duì)HPV-52A、所述引物 對(duì)HPV-53A、所述引物對(duì)HPV-56A、所述引物對(duì)HPV-58A、所述引物對(duì)HPV-59A、所述引物對(duì) HPV-66A、所述引物對(duì)HPV-68A、所述引物對(duì)HPV-73A和所述引物對(duì)HPV-81A組成；所述引物 組合物乙由所述引物對(duì)HPV-16A、所述引物對(duì)HPV-35A、所述引物對(duì)HPV-70A和所述引物對(duì) HPV-82A組成。
[0031] 所述引物組還可包括引物對(duì)GAPDHA(用于鑒定GAPDH內(nèi)參基因）；所述引物對(duì) GAPDHA由序列表的序列44自5'末端第21-41位核苷酸所示的單鏈DNA分子和序列表的序 列45所示的單鏈DNA分子組成。所述引物對(duì)GAPDHA可與所述引物組合物甲組合使用，也 可與所述引物組合物乙組合使用。
[0032] 所述引物組的功能為如下（a)或（b)或（c)或（d) : (a)輔助鑒定待測(cè)人乳頭瘤病 毒為哪種人乳頭瘤病毒；（b)輔助鑒定人乳頭瘤病毒；（c)輔助檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有人 乳頭瘤病毒；（d)輔助鑒定含有人乳頭瘤病毒的待測(cè)樣本中的人乳頭瘤病毒為哪種人乳頭 瘤病毒。
[0033] 本發(fā)明還保護(hù)以上任一所述的引物組在制備試劑盒中的應(yīng)用。所述試劑盒的功能 為如下（a)或（b)或（c)或（d): (a)輔助鑒定待測(cè)人乳頭瘤病毒為哪種人乳頭瘤病毒；（b) 輔助鑒定人乳頭瘤病毒；（c)輔助檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有人乳頭瘤病毒；（d)輔助鑒定含 有人乳頭瘤病毒的待測(cè)樣本中的人乳頭瘤病毒為哪種人乳頭瘤病毒。
[0034] 本發(fā)明還保護(hù)一種試劑盒，包括引物組和通用芯片；
[0035] 所述引物組包括引物對(duì)HPV-6B、引物對(duì)HPV-11B、引物對(duì)HPV-16B、引物對(duì) HPV-18B、引物對(duì)HPV-26B、引物對(duì)HPV-31B、引物對(duì)HPV-33B、引物對(duì)HPV-35B、引物 對(duì)HPV-39B、引物對(duì)HPV-45B、引物對(duì)HPV-51B、引物對(duì)HPV-52B、引物對(duì)HPV-53B、引物 對(duì)HPV-56B、引物對(duì)HPV-58B、引物對(duì)HPV-59B、引物對(duì)HPV-66B、引物對(duì)HPV-68B、引物對(duì) HPV-70B、引物對(duì)HPV-73B、引物對(duì)HPV-81B和引物對(duì)HPV-82B;
[0036] 所述引物對(duì)HPV-6B(用于鑒定HPV-6)由序列表的序列1所示的單鏈DNA分子和 序列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成；所述引物對(duì)HPV-11B(用于鑒定HPV-11)由序列 表的序列3所示的單鏈DNA分子和序列表的序列4所示的單鏈DNA分子組成；所述引物對(duì) HPV-16B(用于鑒定HPV-16)由序列表的序列5所示的單鏈DNA分子和序列表的序列6所 示的單鏈DNA分子組成；所述引物對(duì)HPV-18B(用于鑒定HPV-18)由序列表的序列7所示的 單鏈DNA分子和序列表的序列8所示的單鏈DNA分子組成；所述引物對(duì)HPV-26B(用于鑒 定HPV-26)由序列表的序列9所示的單鏈DNA分子和序列表的序列10所示的單鏈DNA分 子組成；所述引物對(duì)HPV-31B(用于鑒定HPV-31)由序列表的序列11所示的單鏈DNA分子 和序列表的序列12所示的單鏈DNA分子組成；所述引物對(duì)HPV-33B(用于鑒定HPV-33)由 序列表的序列13所示的單鏈DNA分子和序列表的序列14所示的單鏈DNA分子組成；所述 引物對(duì)HPV-35B(用于鑒定HPV-35)由序列表的序列15所示的單鏈DNA分子和