CAATGG(序列表的序列8)。
[0100] 5、用于鑒定HPV-26的引物對如下(5'一3'):
[0101] h游引物:GGTTCGGATAAGCCTACGCCTGGAGTGGATGCAGATGCTG(序列表的序列9);
[0102]下游引物:GCACAGGGTCATAATAATGG(序列表的序列10)。
[0103] 6、用于鑒定HPV-31的引物對如下(5,一3'):
[0104] h游引物:GTTAGGGTCGCGCCAAACTCTCCGTAGTATCACTGTTTGCAATTGC(序列表的序列 11);
[0105]下游引物:GCTCAGGGACACAATAATGG(序列表的序列12)。
[0106]7、用于鑒定HPV-33的引物對如下(5,一3'):
[0107]上游引物:CCCTGTCTCGTTGCGTGTCTCGTGTACTGTCACTAGTTACTTGTGTG(序列表的序列 13);
[0108]下游引物:GCACAAGGTCATAATAATGG(序列表的序列14)。
[0109] 8、用于鑒定HPV-35的引物對如下(5,一3'):
[0110]上游引物:GGTCTACGGTCTACTCACGGCACACCTTGTAATGCTAACCAG(序列表的序列15);
[0111]下游引物:GTGTCTACCATGTCCCCGTC(序列表的序列16)。
[0112] 9、用于鑒定HPV-39的引物對如下(5,一3,):
[0113]上游引物:CGCCAATAGACGAGAGCAGCGGTATGGAAGACTCTATAGAGGTAG(序列表的序列 17);
[0114]下游引物:GCCCAGGGCCACAACAATGG(序列表的序列18)。
[0115] 10、用于鑒定HPV-45的引物對如下(5,一3,):
[0116]上游引物:CGGCTCGTTACTCGCAATGGGGCACAGGATTTTGTGTAGAGG(序列表的序列19);
[0117]下游引物:GCCCAGGGCCATAACAATGG(序列表的序列20)。
[0118] 11、用于鑒定HPV-51的引物對如下(5,一3,):
[0119] h游引物:CGACCGAACTTAGCGACACGAATTCATACTCTTCCCCATGCC(序列表的序列21);
[0120]下游引物:GCGCAGGGTCACAATAATGG(序列表的序列22)。
[0121] 12、用于鑒定HPV-52的引物對如下(5,一3'):
[0122]上游引物:GGACGGAGCATAACGAACGCAGACGGTGGTGGGGTAAGG(序列表的序列23);
[0123]下游引物:GGAATACCTTCGTCATGGCG(序列表的序列 24)。
[0124] 13、用于鑒定HPV-53的引物對如下(5, 一 3'):
[0125] h游引物:CCTCGGACTAACTCGCCTACGTGGACATAGACTGTGTGGTT(序列表的序列 25);
[0126]下游引物:GCCCAGGGACATAATAATGG(序列表的序列 26)。
[0127] 14、用于鑒定HPV-56的引物對如下(5, 一 3'):
[0128] h游引物:GGCGTATCCTCGTGTCGTTCCCTCCACATGTCTAAGGTACTG(序列表的序列 27);
[0129]下游引物:GCCCAAGGCCATAATAATGG(序列表的序列 28)。
[0130] 15、用于鑒定HPV-58的引物對如下(5, 一 3'):
[0131]上游引物:GCCTCTCGTGCTTATCGTCGGTACCTTCCTTAGTTACTTCAGTG(序列表的序列 29);
[0132]下游引物:GCACAAGGTCATAACAATGG(序列表的序列 30)。
[0133] 16、用于鑒定HPV-59的引物對如下(5, 一 3'):
[0134]上游引物:GCCGTGGATAGACTCGTAGGGAAGAAGTAGTAGAAGCACACAC(序列表的序列 31);
[0135]下游引物:GCTCAGGGITTAAACAATGG(序列表的序列 32)。
[0136] 17、用于鑒定HPV-66的引物對如下(5, 一 3'):
[0137]上游引物:GGCGTTACTACTCGTCTGGCGTATTGATTGATTTCACGTGCATC(序列表的序列 33);
[0138]下游引物:GCACAGGGCCATAATAATGG(序列表的序列 34)。
[0139] 18、用于鑒定HPV-68的引物對如下(5, 一 3'):
[0140]上游引物:CGCTCGGAACAGTCGTAGTCGGTACAGCTGATTCAGTAGTAGTAGAC(序列表的序列 35);
[0141]下游引物:GCACAGGGACACAACAATGG(序列表的序列 36)。
[0142] 19、用于鑒定HPV-70的引物對如下(5, 一 3'):
[0143]h游引物:CGAGTACAGGACCCACATCAGCAGCAGGTATGGCCGTTTC(序列表的序列 37);
[0144]下游引物:GCCCAGGGACACAATAATGG(序列表的序列 38)。
[0145] 20、用于鑒定HPV-73的引物對如下(5, 一 3'):
[0146]上游引物:CACGCAGTCATACGGTTCGGAGAGTTGGCATACGTTGTAGTAG(序列表的序列 39);
[0147]下游引物:GCACAGGGACAAAATAATGG(序列表的序列 40)。
[0148] 21、用于鑒定HPV-81的引物對如下(5, 一 3'):
[0149]h游引物:GACCGAGGATAGCGTTACCGTAGAGGCCTTGTATTCTGCAG(序列表的序列 41);
[0150]下游引物:GCACAGGGACACAACAATGG(序列表的序列 36)。
[0151] 22、用于鑒定HPV-82的引物對如下(5, 一 3'):
[0152]h游引物:CTAACGGAGAGACGCAACGGTTTGCTGGAGTAAATGTTTGTG(序列表的序列 42);
[0153]下游引物:GCCCAGGGCCACAATAATGG(序列表的序列 43)。
[0154] 23、用于鑒定GAPDH基因的引物對如下(5, 一 3,):
[0155]h游引物:CACGACTCTACACGCAACCGCCTGTTTCTGGGGACTAGGGG(序列表的序列 44);
[0156]下游引物:ATGGGGAAGGTGAAGGTCGG(序列表的序列 45)。
[0157] 二、通用芯片
[0158] 通用芯片為固定有22種Tag探針的基片(各個探針序列中,下劃線標(biāo)注的區(qū)域為 丁88序列)。1&§探針用基因點樣液(0&口行 &11^〇,86^叩,〇11仙)溶解,終濃度為1〇111,重 復(fù)三次點制到醛基化修飾的玻片上。圖33為通用芯片的探針點陣排布示意圖。
[0159]QC(表面化學(xué)質(zhì)控探針)是一端帶有Hex標(biāo)記,另一端具有氨基修飾的寡核苷酸探 針,用于觀察芯片點樣和固定的效率,其核苷酸序列為NH2-TCACTTGCTTCCGTTGAGG-Hex。BC (空白對照)為基因點樣液,用于質(zhì)控點樣過程中有無樣品殘留污染。PC(雜交質(zhì)控探針)是 一段氨基修飾的寡核苷酸探針,可以與雜交液中添加的熒光標(biāo)記的互補序列(C-PC)雜交, 用于雜交過程的質(zhì)控,其核苷酸序列為NH2-TTTTTTTTTTTTCCTCAACGGAAGCAAGTGAT。NC(陰 性對照探針)是一段氨基修飾的寡核苷酸探針,與雜交液中的所有待檢測序列均不會雜交, 用于觀察有無非特異雜交,其核苷酸序列為nh2-ttttttttttttgttgcttctggaatgagtttgct。 1C(內(nèi)對照探針),為用于鑒定人GAPDH基因的探針,是一段氨基修飾的寡核苷酸探針,與 檢測體系中多重PCR擴增產(chǎn)物中的人GAPDH基因擴增產(chǎn)物進行雜交,用于多重PCR擴增過 程的質(zhì)控。
[0160] 1、用于鑒定HPV-6的探針序列如下(5,一3'):
[0161]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTGAGGAGATCGTAGCTGGTGCAT(序列表的序列 46)。
[0162] 2、用于鑒定HPV-11的探針序列如下(5, 一 3'):
[0163]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTTGCACGAGTTGGGTGAGTTTGG(序列表的序列 47)。
[0164] 3、用于鑒定HPV-16的探針序列如下(5, 一 3'):
[0165]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTCGCAGGAGTCGTTAGATGGC(序列表的序列 48)。
[0166] 4、用于鑒定HPV-18的探針序列如下(5, 一 3'):
[0167]NH2 -TTTTTTTTTTTTTTTGCTCGAAGAGGCGCTACAGATCC(序列表的序列 49)。
[0168] 5、用于鑒定HPV26的探針序列如下(5, 一 3'):
[0169]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTGGTTCGGATAAGCCTACGCC(序列表的序列 50)。
[0170] 6、用于鑒定HPV-31的探針序列如下(5,一3'):
[0171]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTGTTAGGGTCGCGCCAAACTCTCC(序列表的序列 51)。
[0172] 7、用于鑒定HPV-33的探針序列如下(5, 一 3'):
[0173]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTCCCTGTCTCGTTGCGTGTCTCGT(序列表的序列 52)。
[0174] 8、用于鑒定HPV-35的探針序列如下(5,一3,):
[0175]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTGGTCTACGGTCTACTCACGG(序列表的序列 53)。
[0176]9、用于鑒定HPV-39的探針序列如下(5, 一 3,):
[0177]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTCGCCAATAGACGAGAGCAGC(序列表的序列 54)。
[0178] 10、用于鑒定HPV-45的探針序列如下(5, 一 3,):
[0179]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTCGGCTCGTTACTCGCAATGG(序列表的序列 55)。
[0180] 11、用于鑒定HPV-51的探針序列如下(5, 一 3,):
[0181]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTCGACCGAACTTAGCGACACG(序列表的序列 56)。
[0182] 12、用于鑒定HPV-52的探針序列如下(5, 一 3'):
[0183]NH〇-TTTTTTTTTTTTTTTGGACGGAGCATAACG